竹黄竹红菌甲素含量测定方法

JournalofZhejiangForestryCollege

　　文章编号:100025692(2002)0220157204

竹黄竹红菌甲素含量测定方法

林海萍,陈　虹,叶　勇,吴林森

1

1

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2

(1.浙江林学院生命科学学院,浙江临安311300;2.丽水师范专科学校职业技术学院,浙江丽水323800)

摘要:为了掌握竹红菌甲素的测定方法,测得了竹红菌甲素吸收曲线,研究了不同体质分数乙醇溶液浸提、不同浸提时间、竹黄子座不同颗粒度和不同乙醇用量对竹红菌甲素提取效果的影响。结果表明,竹黄子座中竹红菌甲素含量最佳测定方法是将颗粒度为011g・颗的竹黄子座风干品10颗浸泡于100mL无水乙醇中,8d后,稀释10倍,于465nm波长下测定吸光度。图1表3参14

关键词:竹黄;竹红菌甲素;测定方法;吸光度中图分类号:Q949132　　　文献标识码:A竹红菌甲素(hypocrellinA)是名贵野生药用真菌竹黄Shiraiabambusicola的主要有效成分。竹黄菌隶属于子囊菌亚门Ascomycotina,核菌纲Pyrenomycetes球壳目Sphaeriales肉座菌科Hypocreaceae竹黄属

Shiraia

[1,2]

-1

。常寄生在短穗竹Semiarundinariadensiflora、苦竹Pleioblastusamarus、雷竹Phyllostachys

[3]

praecox和篌竹Phyllostachysnidnlaria等的枝秆上。近年来,竹黄越来越引起国内外学者的重视,对其

进行了化学成分、药理作用

[4～6]

和临床应用等方面的研究。结果表明竹黄具有营气卫血,破瘀止

[8,9]

[7]

痛,促进新陈代谢,增强体质等功能光化学疗法药物

[10]

。

竹黄的有效药用成分竹红菌甲素更是倍受关注,它是一种　醌类光动力学色素,也是一种新型的

,经药理实验与临床应用,显示了较强的生理活性和药理作用。其主要药理作用

[11,12]

有镇痛、抗炎、抗菌、抗癌、护肝和保护心血管等。竹红菌甲素的含量是衡量竹黄品质的重要指

[13]

标,但很少有人研究竹黄竹红菌甲素含量测定方法,仅有吕孝敢等报道竹黄乙醇溶液在465nm波

长下有最大吸收,且其他成分在这一波长下无干扰,可借以定量。该报道没有说明乙醇体积分数与用量,也没有说明竹黄浸提时间与颗粒度,而这些因素都直接影响测定结果。本文旨在摸索出竹黄子座中竹红菌甲素含量测定的具体可操作性方法,为竹黄品质鉴定、优良菌株选育和人工培养等研究工作奠定基础。

1　材料与方法

111　材料

11111　竹黄子座　2001年5月1日,在临安九仙山短穗竹上人工采集野生竹黄子座,于室内通风处

风干,注意防霉和避免阳光曝晒。

11112　竹红菌甲素浸提试剂　无水乙醇,分析纯。

收稿日期:2001206229;修回日期:2001211205

作者简介:林海萍(1973-),女,浙江黄岩人,讲师,从事微生物食品和药品加工研究。

158浙江林学院学报　　　　　　　　　　　　　　　2002年6月

112　实验方法

11211　确定测定波长　将1g(10×011g)竹黄子座风干品浸入100mL无水乙醇中,分别在325～630

nm波长下(7230G型分光光度计)每隔5nm测定吸光度,以获得竹红菌甲素吸收曲线,并确定测定

波长。11212　确定浸提试剂体积分数与测定时间　将1g(10×011g)竹黄子座风干品浸入100mL体积分数为30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%与100%乙醇溶液(无水乙醇)中,浸提4h,12h,24h,26h,48h,72h,96h,120h,144h,168h,192h,216h和240h后稀释10倍,在465nm波

长下测定吸光度。通过比较吸光度,选择一个最佳的提取时间和提取溶剂浓度。11213　确定浸提颗粒度　采用2×015g,4×0125g,10×011g和粉状(将竹黄风干品磨成粉后,用棉布包好)4个不同颗粒度组成1g竹黄,分别浸入100mL无水乙醇中,浸提4h,12h,36h,48h,72h,96h,120h,144h,168h,192h,216h和240h,后稀释10倍在465nm波长下测定吸光度。

通过比较吸光度,选择最佳浸提颗粒度。11214　确定浸提试剂用量　将1g(10×011g)竹黄子座风干品浸入50mL,75mL,100mL,125mL和150mL无水乙醇中,浸提4h,12h,24h,36h,48h,72h,96h,120h,144h,168h,192h,216h和240h后,稀释10倍,在465nm波长下测定吸光度,确定最佳浸提试剂用量。2　结果与分析

211　吸收波长对吸光度的影响

由图1可见,竹红菌甲素在波长465nm处有一最大吸收峰,此吸收曲线与万象义等红菌甲素吸收曲线一致,所以确定465nm为竹红菌甲素含量测定波长。212　不同体质分数乙醇,不同提取时间对竹红菌甲[14]

测定的竹

素提取效果的影响由表1可以看出,乙醇体积分数越高,竹红菌甲素的提取效果越好,因为竹红菌甲素为脂溶性色素,能溶于乙醇等有机溶剂而不溶于水。100%乙醇(即无水乙醇)作为浸提试剂提取效果明显比其他浓

度乙醇溶液好,且无水乙醇易于回收,有利于下一

图1　竹红菌甲素吸收曲线

步竹红菌甲素的分离提纯且节约实验费用。在192hFigure1　TheabsorbingcurveofhypocrellinA(即8d)吸光度达到最高值,如继续浸提,则吸光

度略有下降。我们将浸提了240h(10d)后的浸提液过滤,将竹黄子座颗粒继续浸于新的无水乙醇中,除最初浸于无水乙醇的竹黄子座颗粒浸提液吸光度约等于0(可忽略)外,其他浸提液均仍有竹红菌甲素溶出。所以我们选择无水乙醇浸泡竹黄8d后测定吸光度。213　不同颗粒度对竹红菌甲素提取效果的影响

由表2可见除粉状样品外,竹黄颗粒度越小,则乙醇对其所含的竹红菌甲素的提取效果越好。粉

-1

状样品虽然提取速度最快,但34h后反而落后于011g・颗的样品。这可能是因为用棉布包住样品,会有一部分竹红菌甲素被棉布吸收,从而使吸光度下降。而如不用棉布将竹黄粉包起来,则测定时必须过滤,也会有一部分竹红菌甲素损失,从而影响测定准确性。我们将011g・颗的样品浸提了240h(10d)后的浸提液过滤,将竹黄子座颗粒继续浸于新的无水乙醇中,8d后测定浸提液吸光度约等

-1

于0(可忽略)。所以我们选择011g・颗作为测定的颗粒度。214　不同乙醇用量对竹红菌甲素提取效果的影响

由表3可得到,将1g(10×011g)竹黄子座风干品浸入100mL,125mL与150mL无水乙醇中,

-1

经换算成相同乙醇体积,96h后浸提液吸光度无明显差别。而浸入75mL和50mL无水乙醇中,经换算成相同乙醇体积,浸提液吸光度明显较小。所以选择将1g(10×011g)竹黄子座风干品浸入100mL无水乙醇中能得到准确的测定结果,且最节约实验经费。

第19卷第2期　　　　林海萍等:竹黄竹红菌甲素含量测定方法　159

表1　不同体积分数乙醇溶液,不同浸提时间对竹红菌甲素提取效果的影响

Table1　EffectofvariedalcoholliquorπsconcentrationandimmersedtimeonthedistillimpactofhypocrellinA

浸提时间/h

30%

4102234487296120144168192216240

010211010250010408010482010541010594010712010700010744010776010797010804010798

40%010289010458010710010904011093011672011952011952012324012376012469012749012708

50%010410010731011533011803011699012328012557012939012969013060012893013117013071

不同乙醇体积分数下浸提液的吸光度

60%01061901113201182901269601300601331601374401388301403301416701416101411301420470%01052301094201141701233301263501295201322801347401360201368401366801385801375080%010705011344011962012761013135013088013535013690013711013872013924013820013862

90%0109720117760125810129760131570133280134350103520013429013589013531013611013552

100%011603012699013733014317014528014699014685014728014837014847014934014929014793

表2　竹黄不同颗粒度对竹红菌　甲素提取效果的影响Table2　Effectofvariedstomataπsgranularityonthe

distillimpactofhypocrellinA

表3　不同乙醇用量对竹红菌　　甲素提取效果的影响

Table3　Effectofvariedalcoholπsdosageonthe

distillimpactofHypocrellinA

浸提时间/h

4102234487296120144168192216240

不同竹黄颗粒度下浸提液的吸光度

015g・颗-10125g・颗-1011g・颗-1011238012295012580013060012814012909012987013031013149013071013105013032012904

011567012898013586013665013803013783013867013966013956013998013887013773013749

011603012699013733014317014528014699014685014728014837014847014934014929014793

粉状

013851013975014113014095014169014055014209014274014323014254014274014050014114

浸提时间/h

50mL

4102234

487296120144168192216240

011238012295012580012817012814012909012987013031013149013071013105013032012984

75mL011488012595012911013166013241013211013563013732013846014011014304014219014083

100mL011603012691013737014317014528014685014699014728014837014847014934014927014865

125mL012235012898013814014423014629014562014695014869014903014756014928014928014836

150mL012544013251013975014587014656014835014638014825014888014820014897014921014799

不同乙醇用量下浸提液的吸光度

3　结论

通过以上实验,得到竹黄子座中竹红菌甲素含量测定方法:以1g(10×011g)竹黄子座风干品在100mL无水乙醇中浸泡8d后,稀释10倍,465nm波长测定吸光度。

由于竹红菌甲素不溶于水,所以竹黄子座必须经过风干后,才能进行竹红菌甲素含量测定,否则会影响测定准确性。如果天气干燥,竹黄子座可以直接在空气中风干,注意避免阳光曝晒;如果在潮湿的季节,则可将竹黄子座在低于60℃的恒温干燥箱中烘干。如不马上进行测定,应将竹黄子座入冰箱冷藏室中储藏。

160浙江林学院学报　　　　　　　　　　　　　　　2002年6月

4　讨论

本文所得测定方法比前人研究结果更为具体,有较强的可操作性。

在研究中发现竹黄不同个体及同一个体的不同部位竹红菌甲素含量有一些差异,但似乎又无规律可循,因此本文在研究中将它们都同等对待。这必定给实验结果带来一定的误差。在今后的研究中应找出差别的规律,以便取样更加科学。参考文献:

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DeterminingmethodforcontentofhypocrellinAinShiraiabambusicola

LINHai2ping,CHENHong,YEYong,WULin2sen

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(1.FacultyofLifeScience,ZhejiangForestryCollege,Linπan311300,Zhejiang,China;2.Professional

　　TechnologyCollege,LishuiTeachersCollege,Lishui323800,Zhejiang,China)

Abstract:TheabsorbingcurveofhypocrellinAandeffectofalcoholconcentrations,immersedtime,stomatagranularities,alcoholdosagesontheextraetionofhypocrellinAwerestudiedinthepaper.TheresultsshowedthatthebestschemeofdeterminingthecontentofhypocrellinAinShiraiabambusicolastomatawas1gofair2driedstomataofShiraiabambusicola(eachpelletweights011g,amountto10pelletsweresaturatedby100mLofEt2OH.Thenwedilutetheextractby10timesanddeterminetheabsorptionatthewavelengthof465nmafter8days.Keywords:Shiraiabambusicola;hypocrellinA;determiningmothod;extinction