！ 至１２旦 ＲＰ—ＨＰＬＣ测定重楼总皂苷长循环脂质体中 重楼总皂苷的含量 张小飞 ，果秋婷 ，王昌利 （１．陕西中医药大学药学院，陕西咸阳，７１２０４６；２．咸阳职业技术学院医学系，陕西咸阳，７１２０００） 摘要：目的建立ＲＰ—ＨＰＬＣ测定重楼总皂苷长循环脂质体中重楼总皂苷的含量测定方法。方法色谱柱为Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ Ｃ１８ （４．６ ｍｍｘ２５０ ｍｌＴｌ，５ ｔｘｍ）；流动相为乙腈一水（４０：６０，Ｖ／、，）；等度洗脱；流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２１０ ｎｍ；柱温为３Ｏ℃。结果重 楼总皂苷中重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷Ⅱ两种成分分离度较好，重楼皂苷Ｉ、重楼皂苷Ⅱ均在１．Ｏ ２０．０ ｔｘｇ／ｍＬ范围内线性关系良 好（ｒ＝－０．９９９ ９）。二者的回收率均符合要求，ＲＳＤ分别为０．８３％和１．２１％。结论该色谱条件对重楼总皂苷长循环脂质体中两种成分 分离效果较好，辅料无干扰，专属性强、稳定可靠，适用于重楼总皂苷长循环脂质体中重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷ＩＩ的含量测定。 关键词：ＲＰ—ＨＰＬＣ；重楼总皂苷；长循环脂质体；含量测定 中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：２０９６—１４１３（２０１６）２６—００９１—０２ 重楼皂苷Ⅱ主峰保留时间分别为３１．２ ｍｉｎ和４１．０ ｍｉｎ。 重楼（Ｐ０３＂ｌ’．Ｓ ｐＤｚ ｈｙｌｌａ）为百合科植物云南重楼的干燥根 茎，具有清热解毒、消肿止痛等作用，临床用于疔疮痈肿、惊风 抽搐及咽喉肿痛等症Ⅲ。现代药理表明，重楼总皂苷是重楼的 有效活性成分，具有抗肿瘤、抗菌、消炎止血及心血管作用嘲。 目前，重楼主要是以粉末或重楼皂苷提取物直接入药，生物利 用度较低，药效较差，可通过开发重楼总皂苷长循环脂质体来 提高药物的靶向性【引。重楼总皂苷的测定方法主要有紫外分光 光度法 口反相高效液相色谱法［５１。本文通过建立ＲＰ—ＨＰＬＣ法 测定重楼总皂苷长循环脂质体中重楼总皂苷的含量，以期为 重楼脂质体制剂的质量标准鉴定提供参考。 １仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ １１００系列高效液相色谱系统（安捷伦科技有限 （Ｃ） 公司）；ＸＰＥ一分析天平（瑞士梅特勒一托利多仪器有限公司）。 重楼皂苷Ｉ、重楼皂苷Ⅱ对照品（中国食品药品检定研究 院）；重楼总皂苷（实验室提取纯化）；乙腈（色谱纯，默克化学 试剂有限公司）；水为超纯水。 ２方法与结果 ２．１溶液配制 ０．０ １０ ０ ２０．０ ３０．０ ４０．０ （Ｂ） （Ａ） ５０．０ ｒａｉｎ 图１样品ＨＰＬＣ图谱 注：峰１是重楼皂苷Ｉ；峰２是重楼皂苷Ⅱ；图Ａ是空白溶液；图Ｂ是对照 品溶液；图Ｃ是供试品溶液。 ２．２．１对照品溶液制备。１００ ｍＬ容量瓶中加入重楼皂苷Ｉ及重 楼皂苷Ⅱ对照品各１０．０ ｍｇ，用一定量的乙腈溶解并用流动 相定容制备成浓度为０．１ ｍｇ／ｍＬ对照品贮备液。５０ ｍＬ容量 瓶中移入５ ｍＬ对照品储备液并用流动相定容，过０．４５ Ｉｘｍ 滤膜，制备浓度为１０．０ Ｉｘｇ／ｍＬ的重楼皂苷Ｉ及Ⅱ对照品溶液。 ２．２．２供试品溶液制备。采用薄膜分散一挤出法制备重楼总皂 苷长循环脂质体。向１００ ｍＬ容量瓶中加入５ ｍＬ重楼皂苷脂 质体，用一定量乙腈超声破乳后并用流动相定容，过０．４５ Ｉｘｍ 滤膜，制备供试品溶液。同法制备空白溶液。 ２．２色谱条件 ２．４方法学考察 ２．４．Ｉ线性关系考察。５０ ｍＬ容量瓶分别精密移取重楼皂苷Ｉ 及Ⅱ的对照品溶液０．５、１．０、２．０、５．０、１０．０ ｍＬ，分别采用流动 相定容、摇匀后即得浓度分别为１．０、２．０、５．０、１０．０、２０．０ＩＪｅｇｍＬ 的重楼皂苷Ｉ及Ⅱ对照品溶液。按照拟定色谱条件进样分析， 得重楼皂苷色谱图。以峰面积（Ａ）为纵坐标、浓度（Ｃ，ｔｘｇ／ｍＬ） 为横坐标进行线性回归拟合。重楼皂苷Ｉ及Ⅱ的回归方程分别 为：Ａ－５３ ２１８Ｃ一８ ７２５＠＝０．９９９ ９）和Ａ－－２１ ８４８Ｃ＋４ ７４９（ｒ＇－０．－９９９ ９）， 色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ Ｃ１８（４．６ ｍｍｘ２５０ ｍｍ，５ ｍ）；流动 相：乙腈一水（４０：６０，Ｖ／Ｖ），等度洗脱；检测波长：２１０ ａｍ；流 速：Ｉ．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；进样量：２Ｏ．０ Ｌ。 ２－３系统适用性考察 按照“２．２”项下的色谱条件对“２．１”项下制备的供试品溶液 进行检测。由图１可知重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷Ⅱ之间分离度良 在线性范围１．０～２０．０￣ｇ／ｍＬ，检测灵敏度良好。 ２．５精密度考察。按照“２．２．Ｉ”项下操作制备对照品溶液，重复 进样６次，按照峰面积值计算，重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷Ⅱ对照 品溶液的ＲＳＤ值分别为０．９７％、１．０１％，仪器精密度良好。 ２．６重复性考察。取自制重楼总皂苷长循环脂质体溶液按照 “２．２．２’硕下制备供试品溶液，并进行测定，重复进样６次，计算 （下转第９４页） 好（Ｒ＞１．５），拖尾因子、理论塔板数均符合要求。重楼皂苷Ｉ和 作者简介：张小飞（１９８２一），男，汉族，内蒙赤峰人，讲师，硕士。研究方向：中药新技术与新剂型。 基金项目：陕西教育厅项目（Ｎｏ．２０１３ＪＫ０８１６）；陕西省教育厅课题（Ｎｏ．０９ＪＳＯ１４）；陕西省科技厅项目（Ｎｏ．２０１５ＳＦ２０３） 陕西省中药制药重点学科资助项目（Ｎｏ．１００８）。 一９１— Ｑ 鱼生！至旦 ３讨论 参考文献： ［１】程刚，刘耀明，贺云飞，等．ＬＣＰ、ＤＨＳ和ＰＦＮＡ治疗股骨粗隆间骨折 临床研究［Ｊ］．海南医学，２０１２，２３（３）：４４－－４７． 【２】赵晶鑫，苏秀云，赵酷，等．股骨近端髓内钉治疗股骨粗隆间骨折的 影像学分析［Ｊ】＿ｊＥ京大学学报：医学版，２０１５，４７（２）：２６３—２６８． 【３】林振恩，林焱斌．ＰＦＮＡ、Ｇａｍｍａ钉和ＤＨＳ治疗股骨粗隆间骨折疗 效比较［Ｊ］．山东医药，２００８，４８（２７）：１０９—１ １０． ［４］谢华杰，孔繁杰，覃奇文，等．闭合复位ＰＦＮＡ内固定治疗股骨粗隆 间骨折２０例疗效观察『Ｊ］．海南医学，２０１４，２５（１５）：２２８７—２２８８． 【５】康进军，贺廷永，邓杰，等．ＰＦＮＡ与ＤＨＳ治疗股骨粗隆间骨折的疗 效比较［Ｊ］．实用骨科杂志，２０１３，１９（６）：４９７—５００． ［６］马俊，王卫明，张佳田，等．应用防旋股骨近端髓内钉治疗股骨粗隆 间骨折效果分析【Ｊ］．中国基层医药，２０１５（１６）：２５０９—２５１１． 【７】张杰，李军，吴伟，等．ＤＨＳ、ＰＦＬＣＰ与ＰＦＮＡ治疗股骨粗隆间骨折疗 效比较［Ｊ】．蚌埠医学院学报，２０１４，３９（１１）：１５４９—１５５１． 目前，临床上主要采用ＤＨＳ和ＰＦＮＡ来治疗股骨粗隆间 骨折，ＤＨＳ主要是以滑动加压螺钉插入患者股骨头颈部位置 为固定目的，并在尾部增加钢板加压固定，虽然治疗效果较 高，但会对机体产生较大伤害，术后并发症发生率较高旧。 ＰＦＮＡ具有创伤小、操作简单等优点，能够避免因患者身材矮 小无法放置螺钉的问题，并且能更好地对松质骨进行填压， 有利于缩短手术时间，减少术中出血量１７１。本次研究结果显 示，治疗组患者手术时间、术中出血量、外出行走时间、骨折 愈合时问、髋关节功能优良率明显优于对照组（Ｐ＜０．０５）；治疗 组患者术后并发症发生率明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。 综上所述，应用ＰＦＮＡ治疗股骨粗隆间骨折，不仅能提高 临床治疗效果，还能降低术后并发症发生率，值得推广。 （上接第９ｌ页） 重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷Ⅱ的含量。脂质体中重楼皂苷Ｉ的平均含 析，并记录色谱峰面积，按照外标一点法计算重楼皂苷Ｉ和重 量为（０．１２￣０．０８）ｍｇ／ｍＬ（ＲＳＤ＝０．７３％），重楼皂苷Ⅱ的平均含量 为（Ｏ．２０￣０．０６）ｍｇ／ｍＬ（ＲＳＤ＝０．６２％），表明色谱方法重复性良好。 楼皂苷Ⅱ的含量。３批重楼总皂苷长循环脂质体中重楼总皂 苷的含量为（Ｏ．３８￣０．０５）ｍｇ／ｍＬ。 ３讨论 ２．７回收率考察。按制剂处方量的８０％、１００％、１２０％加入３份 重楼皂苷Ｉ、重楼皂苷Ⅱ对照品，并加入处方量磷脂、胆固醇、 聚乙二醇２０００一磷脂酰乙醇，按照“２．２．２”项制备高、中、低三 本方法操作简便、快速，对重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷Ⅱ分离 效果较好，能够保证检测重楼长循环脂质体中重楼总皂苷含 量的可靠性和稳定性，为该制剂的质量标准提供依据。 参考文献： ［１】何明生，李秀．重楼药理作用的研究进展［Ｊ］．世界中医药，２０１２，７（６）： ２７９－２８２． 种浓度的供试品溶液，在拟定色谱条件下进样分析，记录峰 面积。按照外标法求出重楼皂苷Ｉ和重楼皂苷Ⅱ的回收率。重 楼皂苷Ｉ的回收率为１００．２％（ＲＳＤ＝０．８３％），重楼皂苷Ⅱ的回 收率为９９．１％（ＲＳＤ＝Ｉ．２１％），表明色谱方法回收率良好。 ２．８稳定性考察。按“２．２．１”项下操作配制６份对照品溶液，在 ２５℃下放置４８ ｈ，并于０、２、４、８、２４、４８ ｈ对对照品进行测 定，计算两种重楼皂苷对照品的峰面积。重楼皂苷Ｉ峰面积的 ＲＳＤ值为１．１３％，重楼皂苷Ⅱ峰面积的ＲＳＤ值为０．８７％，表 明对照品溶液在４８ ｈ内测定结果稳定。 ［２］赵保胜，朱寅荻，马勇．中药重楼研究进展［Ｊ】．中国实验方剂学杂志， ２０１ １，１７（１ １）：２６７－２７０． 【３】张小飞，果秋婷，王昌利．重楼总皂苷长循环脂质体的制备与表征 中国药师，２０１５，１８（６）：９０７—９１２． ［４］杨骁，张振秋．重楼中总皂苷的含量测定［ 中华中医药学刊，２０ｏ７， ２５（１ １）：２４２０—２４２２． 【５】罗云，熊志伟，梁新丽，等．重楼总皂苷巴布剂的基质处方优化及含 量测定Ⅲ．中国实验方剂学杂志，２０１４，２０（２２）：５—９． ２．９制剂中药物含量测定。按照“２．２．２”项下制备３批重楼总 皂苷长循环脂质体供试品溶液，按照拟定的色谱条件进样分 （上接第９２页） ２．２两组患者Ｈａｒｒｉｓ髋关节功能评分比较 出院时，两组患者的Ｈａｒｒｉｓ髋关节功能评分比较无明显 快、术后的并发症较少，受到患者和临床医生的青睐ｆ３１。 本次研究结果显示，手术前，两组患者患肢长度差、髋关 差异（Ｐ＞０．０５）；出院后１个月、３个月、６个月，观察组患者的 Ｈａｒｒｉｓ髋关节功能评分均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５，表２）。 表２两组患者Ｈａｒｒｉｓ髋关节功能评分比较（ｎ＝２５，元±ｓ） 节疼痛评分、髋关节活动度等指标比较差异不明显（Ｐ＞０．０５）； 手术后，两组患者的各指标均有显著改善，且研究组患者优 于对照组患者，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；手术后１个 月、３个月、６个月，观察组患者的Ｈａｒｒｉｓ髋关节功能评分明 显高于对照组患者（Ｐ＜０．０５）。 综上所述，微创小切１：３全髋关节置换对类风湿性关节炎 髋关节功能的恢复有较好的效果，值得在临床上推广使用。 参考文献： ［１１明江华，］方海滨，周建林，等．／Ｊ、切口全髋关节置换治疗类风湿性髋 关节炎的临床观察［Ｊ］．临床外科杂志，２００８，１６（９）：６１２—６１４． 【２】廖化敏，官莉．延续护理对５３例人工髋关节置换术后患者康复效 果的影响【Ｊ］．重庆医学，２０１５，４４（１０）：１４３５—１４３６． ［３］王永贵，唐本森．全髋关节置换术治疗类风湿性髋关节炎的临床观 察ｆＪ］．中国实用医药，２０１ｌ，６（３２）：１６０９—１６１０． ３讨论 随着医疗技术的提高，微创小切口全髋关节置换手术开 始在临床中广泛应用。与传统的手术方法比较，微创小切口 手术切口更小、手术时间更短、失血较少、患者康复时间更 一９４一