实验血药法测定扑热息痛片的生物利用度[1](精)

一、实 验 目 的：

1 掌握血药法测定固体口服制剂生物利用度的原理及方法。 2 掌握药动学参数的求算。

3 熟悉生物利用度在药物评价中的意义。 4 了解血清生物样品的处理方法。

二 、仪 器：

1．仪器：

具塞离心管10ml 3支;20ml 16支; 刻度吸管1ml 1支;5ml 3支;10ml 1支; 滴管2～3支；

玻璃漏斗3～4cm直径8个;5ml塑料离心管8支; 紫外－可见分光光度计

其他：滤纸、试管架、刀片、塑料夹、酒精棉球、脱脂棉、注射器、注射针头、兔盒等物件。

2．试药：

①0.12N氢氧化钡溶液：取分析纯氢氧化钡19克，加新鲜煮沸放冷的蒸馏水溶解并稀释至1000 ml，静置过夜，过滤即得。

②2%硫酸锌溶液：取分析纯硫酸锌20克，加蒸馏水溶解并稀释至1000ml即得。

三 、实验内容：

1． 家兔空白血的采集：

取体重3kg左右家兔一只，心脏取血约30ml，于10ml具塞离心管中，37℃水浴中保温1小时，以5000转/分的转速离心10 min，取空白血清供标准曲线制备用。

2． 标准曲线的制备：

精密称取扑热息痛对照品50mg，置100ml容量瓶中，以蒸馏水溶解，并添加至刻度摇匀，精密吸取10ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度摇匀即成100µg/ml的标准溶液，分别吸取表1中“标准液取量”于20ml具塞试管中，分别加定量蒸馏水使成10ml，然后各加上述血清1ml混匀，再各加0.12N氢氧化钡4.5ml，混匀，放置2分钟，再分别加入2%硫酸锌溶液4.5ml，混匀，即现出明显乳状浑浊，用双层滤纸过滤，去初滤液，收集续滤液于10~15ml干燥具塞试管中，以1号管溶液作空白对照，于245nm处测定吸收度(A)，结果记录于表1。

3．家兔体内血药浓度的测定： ①血样品的采集：

取体重3kg的健康家兔一只，实验前二天下午禁食，实验当日晨耳静脉取血4ml，作为空白，然后即口服给予扑热息痛片，剂量为500mg/只，在给药后0.25、.50、1、2、3、4、5小时耳静脉采血4ml，供测定血药浓度用，喂药4小时后可以喂食，采血时间于表2。

②血药浓度测定：

将采取的血样按前空白的处理方法处理后，精密吸取血清1 ml，加蒸馏水10ml，余下按标准曲线制备中“……再各加0.12N氢氧化钡溶液4.5ml”起进行操作，测得值记于表2。

表1 标准曲线测定结果 管 号 标准液取量 (ml) 血药浓度C (μg/ml) H2O (ml) 吸收度A 1 0 0 10 2 0.4 40 9.6 3 0.8 80 9.2 4 1.2 120 8.8 5 1.6 160 8.4 6 2.0 200 8.0 7 2.4 240 7.6 8 2.8 280 7.2 表2 血药浓度测定结果

兔重： 给药量： 给药时间： 编 号 采血时间 时间t (h) A值 血药浓度C (μg/ml) lgC

0 空白 1 0.25 2 0.5 3 1 4 2 5 3 6 4 7 5 四、实验结果及数据处理：

1．标准曲线的回归分析及绘制：

以表1中吸收度A对标准曲线中血药浓度C直线回归，求得直线回归方程 A = a + bC，并计算相关系数r 。

以A为纵坐标，C为横坐标绘制标准曲线。测得样品A值，代入回归方程，计算出C值

CAa b2．药时曲线的绘制：

表2中的实验数据，以浓度C对时间t作图，即得药物浓度经时变化曲线。 3． 消除速率常数k的求算：文献载扑热息痛的体内过程系一室模型，血管外给药一室模型动力学方程的解为：

katktCA(ee) ①

kaFX0A其中

Vkak

假设ka>k，当t充分大时，①式中

ekat首先趋向于零，而可忽略，故①式可改写为：

CAekt

②

②式两端取对数：

klgCtlgA ③

2.303

用药时曲线中尾部近似于直线上的3点，即尾部数据，代入式③作直线回归，求出系数：

a =＿＿＿＿＿＿ b = ＿＿＿＿＿＿

则：k =﹣2.303 b A = Lg-1 a 4． 半衰期t1/2的计算：

t1/2 = 0.693/k

5． 药时曲线下面积AUC0→∞的计算：

将表2中时间t和浓度C代入下式即可求出AUC0→∞

AUC0Cn1[(C(a1)Ca)(tat(a1))]2k

6．扑热息痛片相对生物利用度计算：

若已知扑热息痛片某一标准制剂(如半合成脂肪酸脂)的AUC0→∞=1093(μg﹒h﹒ml-1)，则用下式可计算出扑热息痛片的相对生物利用度：

AUC0样品100%

FrelAUC0标准

五 思考题：

1 血药法在生物利用度研究中的意义。 2 本实验血清样品处理的特点。 3 生物利用度在新药评价中的意义。