３４７８ 实用医学杂志２０１３年第２９卷第２１期 ［２］ 汤志刚，孙振阳，胡何节，等组织因子途径抑制物２基因 ［５］ Ｄｏｎｇ Ｓ Ｗ，Ｍａ Ｌ，Ｘｕ Ｎ，ｅｌ ａ１．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ 对Ｐａｎｅ—ｌ细胞裸鼠成瘤及转移的影响［Ｊ］．中华实验外科 杂志，２００７，２４（１Ｏ）：１２１５—１２１７． ｏｆ Ｓｙｋ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｎｅｏｐｌａｓｍａ，２０１ １，５８（１）： ８９—９５． ［３］ Ｗａｎｇ Ｓ，Ｘｉａｏ Ｘ，Ｚｈｏｕ Ｘ，ｅｔ ａ１．ＴＦＰＩ一２ ｉｓ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙ— ［６］ Ｗｕ Ｄ，Ｘｉｏｎｇ Ｌ，Ｗｏ Ｓ，ｅｔ ａ１．ＴＦＰＩ一２ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ，２０１０， ｌＯ（１）：６１７—６２１． ｌｉｎ Ｊ，Ｉｏｃｈｍａｎｎ Ｓ，Ｂｌｅ ｃｈｅｔ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ［４］ Ｒｏｌｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－２ ｇｅｎｅ ｉｎ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｅａｎｅｅｒ［Ｊ］．２０１２，７６（１）： ｌＯ６一ｌｌ１． ａ１．Ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｈｙｐｅｔｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ［７］ Ｋｗｏｎｇ Ｊ，Ｌｏ Ｋ Ｗ，Ｔｏ Ｋ Ｆ，ｅｔｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎ— ｃｅｒ Ｒｅｓ，２００２，８（１）：１３１—１３７． ｎｏｎ—ｓｍａｌｌ—ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２００５，９２（４）： ７７５—７８３ （收稿：２０１３—０３—２１ 编辑：王耀东） ＶＸ一６８０对Ｔ２４细胞增殖的抑制作用及对 ＣｙｃｌｉｎＤ １和ＣｙｃｌｉｎＢ １表达的影响 肖宁 周兴 曾格瓦 赵晓昆 蒋宏毅赵洪青 摘要 目的：探讨Ａｕｒｏｒａ Ａ激酶抑制剂ＶＸ一６８０对人膀胱癌Ｔ２４细胞增殖的抑制作用及对ＣｙｃｌｉｎＤ１和 ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ表达的影响及意义。方法：体外培养Ｔ２４细胞．分别给予不同浓度及不同作用时间的 ＶＸ一６８０．采用ＭＴＴ法检测细胞增殖能力：ＲＴ—ＰＣＲ检测Ｔ２４细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ的表达水平 结果：Ｍ ＩＴＩ１结果显示：１００～５００ ｎｍｏｌ／Ｌ ＶＸ一６８０作用２４、７２ ｈ均对Ｔ２４细胞有明显抑制作用，呈浓度依赖 性且７２ ｈ时抑制效果更显著：１００～５００ ｎｍｏｌ／Ｌ ＶＸ一６８０作用７２ ｈ后，各组Ｔ２４细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ ｍＲＮＡ的表达水平下调，呈浓度依赖性。结论：Ａｕｒｏｒａ激酶抑制剂ＶＸ ６８０可能通过下调ＣｙｃｌｉｎＤ１和 ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ表达显著抑制人膀胱癌Ｔ２４细胞增殖，且具有浓度依赖性 关键词 膀胱肿瘤； ＶＸ一６８０； 细胞增殖； ＣｙｃｌｉｎＤ１； ＣｙｃｌｉｎＢ１ 尿路上皮（移行）细胞癌（ｕｒｏｔｈｅｌｉｕｍ／ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．简称ＢＴＣＣ）常分为非肌 层浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌，而后者无 （美国Ｇｉｂｃｏ公司）；胎牛血清（美国Ｇｉｂｃｏ公司）； Ｍ１Ｙｒ（美国Ｓｉｇｍａ公司）；Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ提取试剂 （美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；ＲＴ。ＰＣＲ试剂盒（美国 Ｐｒｏｍｅｇａ公司）：引物及内参（上海生工生物工程公 司）：ＥＣＬ试剂（美国Ｓａｎｔａ公司）。 １．１．２仪器ＩＭＴ一２倒置显微镜（日本ＮｉＫｏｎ公 司）；台式高速冷冻离心机（美国Ｓｉｇｍａ公司）； Ｍｉｌｌｉｐａｋ＠４０纯水系统（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）； ＥＬＸ８００酶标仪（美国Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ公司）；ＰＣＲ仪 论手术或者放化疗治疗均较困难…。Ａｕｒｏｒａ Ａ过 表达与肿瘤的发生发展有关［ 。研究 ｓ 报道Ａｕｒｏｒａ 激酶抑制剂ＶＸ一６８０对Ａ５４９、ＭＣＦ一７、ＲＫＯ、Ｕ２０Ｓ， ＮＣＩ．Ｈ１２９９细胞都有抑制增殖作用。本研究拟探 索ＶＸ．６８０对人膀胱癌Ｔ２４细胞增殖的抑制作用 及对细胞周期蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ表 达的影响，旨在为治疗膀胱癌探寻新的治疗方法。 １材料与方法 （德国Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司）：９６孑Ｌ、６孑Ｌ细胞培养板（美 国Ｃｏｒｎｉｎｇ公司） １．２方法 １．１材料 １．１．１细胞及试剂人膀胱癌细胞株Ｔ２４购自上 海门谍塔生物科技发展有限公司。ＤＭＥＭ培养基 Ｉ．２．１ 细胞培养用含１０％胎牛血清、ｌ ｍｍｏｌ／Ｌ 丙酮酸钠和１００ Ｕ／Ｌ青霉素及链霉素的ＤＭＥＭ培 养基，于３７℃、５％ＣＯ 培养箱中培养Ｔ２４细胞，每 ３天换液１次，并传代培养，培养细胞至对数生长 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—５７２５．２０１３．２１．０ｌ３ 作者单位：５１０２６０ 广州医科大学附属第二医院泌尿外科 （肖宁，周兴，曾格瓦）；４１００１１长沙市，中南大学湘雅二医院泌 尿外科（赵晓昆，蒋宏毅．赵洪青） 通信作者：周兴Ｅ—ｍａｉｌ：ｌ３９２４１８２０７２＠１６３．ｅｏｍ 期。 １．２．２ ＭＴＴ检测细胞增殖抑制 取对数生长期的 Ｔ２４细胞接种于９６孔板，每孔细胞数１ Ｘ １０ ，每孔 体积为２００ ｔｘＬ，每组６复孑Ｌ。培养板置人细胞培养 实用医学杂志２０１３年第２９卷第２１期 箱中，在３７℃、５％ＣＯ：及１００％湿度条件下培养 ２４ ｈ 取出培养板，加入不同浓度的ＶＸ一６８０（设３ 个不同浓度组：１００、３００、５００ ｎｍｏｌ／Ｌ培养基，同时 设立ｃｏｎｔｒｏｌ组）。将各组９６孔板在３７℃，细胞培 养箱中孵育２４和７２ ｈ。将５×ＭＴＴ用Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ稀释成１ Ｘ ＭｑＴ，每孔加５０ Ｌ Ｉ Ｘ ＭＴＴ，在 ３７℃孵育４ ｈ。每孔加入ＤＭＳＯ １５０ Ｌ，用平板摇 床摇匀充分振荡１０ ｍｉｎ。用酶标仪在５７０ ｎｍ波长 下检测各孔的吸光度。计算ＶＸ一６８０对Ｔ２４细胞的 存活率：细胞的存活率以Ｔ／Ｃ％表示（Ｔ为加药细 胞的ＯＤ值，Ｃ为对照细胞的ＯＤ值），细胞存活 率％＝（加药细胞ＯＤ／对照细胞ＯＤ）Ｘ １００％。计算 半数抑制浓度（ＩＣ∞）。 １．２．３ ＲＴ—ＰＣＲ检测ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ表 达选择抑制效果最显著时间的不同浓度组ＶＸ ６８０处理的Ｔ２４细胞．加入１ ｍＬ Ｔｒｉｚｏｌ提取液提取 细胞总ＲＮＡ。参照ＲＴ．ＰＣＲ试剂盒说明书进行操 作．ＣｙｃｌｉｎＤ１引物：上游５ ．ＣＧＴＧＧＣＣＴＣ ＴＡＡＧＡＴ— ＧＡＡＧＧ．３ ，下游：５ ．ＣＴＧＧＣＡ１＿Ｉ ＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧ． ３ ，扩增产物１８５ ｂｐ：ＣｙｃｌｉｎＢ１引物：上游：５ ． ＣＣＡＡＡＡＴＧＣＣＴＡＴＧＡＡＧＡＡＧ．３ ，下游：５ ．ＣＴＴＧ． ＧＡＧＡＧＧＣ ＡＧＴＡＴＣＡＡＣ一３ ，扩增产物２１ １ ｂｐ；内 参ＧＡＰＤＨ引物：上游：５ ．ＡＣＣＡＣＡＧＴ ＣＣＡＴＧＣ． ＣＡＴＣＡＣ一３ ，下游：５ ．ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＡ． ３ ，扩增产物４５０ ｂｐ。反应条件为：９５ ｏ【＝预变性５ ｍｉｎ，９４℃变性３０ Ｓ，５４℃退火３０ Ｓ，７２ 延伸３０ Ｓ， 共４０个循环；７２℃再延伸５ ｍｉｎ。扩增产物经 １．５％琼脂糖凝胶电泳鉴定，凝胶成像仪成像分析 灰度值。以上所有实验重复３次。 １．３ 统计学分析 用ＳＰＳＳ １６．０统计软件包及 ＥＸＣＥＬ软件处理分析所得数据。计量资料以 ±Ｓ 表示，采用多个样本均数间两两比较的方差分析， 各组问比较应用单因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为差 异有统计学意义 ２结果 ２．１ ＭＴＴ法检测ＶＸ．６８０对人膀胱癌Ｔ２４细胞体 外增殖的影响ＭＴＴ结果显示：１００～５００ ｎｍｏｌ／Ｌ ＶＸ．６８０对膀胱癌Ｔ２４细胞有抑制作用。且有明显 的浓度依赖性，且７２ ｈ较２４ ｈ更明显（表１）。应用 ＳＰＳＳ １６．０ ｐｒｏｂｉｔ回归分析计算出ＶＸ．６８０的ＩＣ ２４ ｈ的ＩＣ５ｏ＝２．５６９ Ｘ １０ ｎｍｏｌ／Ｌ；７２ ｈ的ＩＣ铀＝ ７６１．２２２ ｎｍｏｌ／Ｌ。 ２．２ ＲＴ．ＰＣＲ检测Ｔ２４细胞中ＣｙｃｌｉｎＤ １和ＣｙｃｌｉｎＢ １ ｍＲＮＡ的表达 ＭＴＴ结果显示．ＶＸ．６８０对Ｔ２４细 胞的抑制作用，７２ ｈ较２４ ｈ更明显，故选择７２ ｈ 组行ＲＴ．ＰＣＲ检测，其结果显示：实验组Ｔ２４细 表１不同浓度的ＶＸ．６８０对Ｔ２４细胞体外增殖的 影响（ＭＴＦ法） ±Ｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ ０．９９１＂１－０．０４５ ０．９８９±０．０５７ １００ ｎｍｏｌ／Ｌ ０．９３６±０．０３６ａ ０．７９０±０．０３８ａ，ｄ ３００ ｎｍｏｌ／Ｌ ０．９０４ ４－０．０３８ａ ０．７３７±０．０３４ａ，ｂ， ５００ ｎｍｏｌ／Ｌ ０．８８８±０．０１７ａ，ｂ，ｃ ０．５３２±０．０１３ａｌｂ，ｃ・ 注：与ｃｏｎｔｒｏｌ对比，ａＰ＜Ｏ．０５；与１００ ｎｍｏｌ／Ｌ对比，ｂＰ＜ ０．０５；与３００ ｎｍｏｌ／Ｌ对比，ＣＰ＜０．０５；与２４ ｈ对比，ｄＰ＜０．０５ 胞中ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ ｍＲＮＡ的表达水平降低， 呈浓度依赖性。实验组与对照组、各实验组之间比 较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表２、图１。 表２ ＲＴ．ＰＣＲ检测不同浓度ＶＸ一６８０处理Ｔ２４细胞７２ ｈ后 ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ的表达（ｎ＝４） 面±５ 注：与ｃｏｎｔｒｏｌ对比，ａ Ｐ＜Ｏ．０５；与１００ ｎｍｏｌ／Ｌ对比，ｂＰ＜ ０．０５；与３００ ｎｍｏｌ／Ｌ对比．ｃ Ｐ＜０．０５ 注：Ｃ，Ｃｏｎｔｒｏｌ；１，１００ ｎｍｏｌ／Ｌ；２，３００ ｎｍｏｌ／Ｌ；３，５００ ｎｍｏｌ／Ｌ 图１ ７２ ｈ时不同浓度ＶＸ一６８０对Ｔ２４细胞中ＣｙｃｌｉｎＤ１和 ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ表达的影响 ３讨论 膀胱癌在全球恶性肿瘤中位居第９位，其中 在男性恶性肿瘤中居第７位，而女性中居第１７ 位 。膀胱癌包括ＢＴＣＣ、鳞状细胞癌、腺细胞癌以 及比较少见的肉瘤、小细胞癌、混合型癌和转移癌 等，其中９０％为ＢＴＣＣ Ｅ 。ＢＴＣＣ最常见分为非肌层 浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌，其中非肌层 浸润性膀胱癌约占膀胱肿瘤的７０％．肌层浸润性 ３４８０ 膀胱癌行根治性膀胱切除术后有５０％的患者出现 转移，５年生存率为３６％～５４％，而且根治性手术 难度高、并发症多以及辅助性化疗和放疗效果不 佳 。因此，探索有效治疗膀胱癌的新方法已经成 为临床上迫切需要解决的实际问题 Ａｕｒｏｒａ激酶家族（包括Ａｕｒｏｒａ Ａ、Ａｕｒｏｒａ Ｂ、 Ａｕｒｏｒａ Ｃ）广泛参与细胞有丝分裂的过程，其中 Ａｕｒｏｒａ Ａ是该家族的一个重要成员，作为中心体相 关激酶，当其过表达时可使中心体扩增、染色体不 稳定和细胞恶性转化２。鉴于Ａｕｒｏｒａ激酶在肿瘤 细胞周期进程中的调控作用以及特异性高表达的 特征．希望通过抑制Ａｕｒｏｒａ激酶达到靶向治疗肿 瘤作用 ＶＸ一６８０是一种靶向Ａｕｒｏａｒ Ａ ＡＴＰ结合位 点的小分子抑制剂．但由于该ＡＴＰ结合位点在人 类的３种Ａｕｒｏｒａ激酶中结构相似，故此复合物可 同时抑制３种Ａｕｒｏｒａ激酶 。实验证实ＶＸ．６８０能 抑制包括乳腺癌、淋巴瘤、前列腺癌、胰腺癌、黑色 素瘤、颈部肿瘤等肿瘤细胞增殖 。 本实验选择人膀胱癌Ｔ２４细胞进行体外培 养．观察ＶＸ．６８０对Ｔ２４细胞增殖的影响 ＭＴＴ法 结果显示１００、３００、５００ ｍｏｌ／Ｌ ＶＸ．６８０在２４ ｈ和 ７２ ｈ均可抑制Ｔ２４细胞生长．呈现浓度依赖性和 时间依赖性．而且在７２ ｈ不同浓度组之间都存在 统计学差异。Ｈａｒｒｔｉｏｎｇ等 发现ＶＸ．６８０对裸鼠种 植的人类肿瘤细胞有抑制能力，在人类急性髓性 白血病细胞ＨＬ．６０的裸鼠模型实验中，给予裸鼠 每天２次腹腔内注射剂量为７５ ｍｇ／ｋｇ的ＶＸ．６８０． １３ ｄ后肿瘤体积与对照组相比减少９８％．存在剂 量效应关系：ＶＸ．６８０还能诱导胰腺癌和结肠癌细 胞裸鼠模型的肿瘤消退。本实验计算出Ｖｘ一６８０的 ＩＣ５０：２４ ｈ的ＩＣ５ｏ＝２．５６９ ｘ １０ ｎｍｏｌ／Ｌ；７２ ｈ的ＩＣ５０ ：７６１．２２２ ｎｍｏｌ／Ｌ Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ等Ｆ７１还发现ＶＸ一６８０ 结肠癌和直肠癌细胞株的ＩＣ∞一般处于５０～ １ ０００ ｎｍｏｌ／Ｌ之间．而血液系统恶性肿瘤细胞株 的ＩＣ ｎ处于１ ０～２５０ ｎｍｏｌ／Ｌ之间，Ａｒｌｏｔ—Ｂｏｎｎｅｍａｉｎｓ 等 发现甲状腺未分化癌细胞株的Ｉｃ 处于２５～ １５０ ｎｍｏｌ／Ｌ之间．． 肿瘤是一种细胞周期性疾病，ＣｙｃｌｉｎＤ１作为 细胞周期重要的正调控因子，驱动细胞从Ｇ 期进 入Ｓ期，促进细胞增殖，在肿瘤的发生发展过程中 起着重要的作用Ｅ９。本实验通过ＲＴ．ＰＣＲ发现ＶＸ一 ６８０使ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ １ ｍＲＮＡ表达下调，且呈 明显的浓度依赖性。Ｗｕ等 ｊ通过ＤＬＣ．１基因转染 结肠癌ＨＴ２９细胞后发现可以明显抑制细胞增殖 和转移能力，通过ＲＴ．ＰＣＲ发现ＣｙｃｌｉｎＤ１ ｍＲＮＡ 表达下调。Ｙｕａｎ等“通过转染ｓｉＲＮＡＣｙｃｌｉｎＢ１能 实用医学杂志２０１３年第２９卷第２１期 降低Ｈｅｌａ、ＭＣＦ２７、ＢＴ２７４７ＭＤＡ—ＭＢ．４３５等肿瘤细 胞中ＣｙｃｌｉｎＢ１的表达水平，从而使细胞阻滞在 Ｇ。／Ｍ期，出现增殖抑制。所以Ａｕｒｏｒａ激酶抑制剂 ＶＸ．６８０可能是通过下调ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ１ ｍＲＮＡ表达抑制人膀胱癌Ｔ２４细胞增殖 肿瘤的发生发展离不开细胞增殖的失控和细 胞凋亡的抑制，两者共同引起体内活细胞的动态 平衡的破坏ｌＩ２：。本实验虽然证实ＶＸ．６８０可能通 过下调ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ１的表达抑制Ｔ２４细 胞增殖，但仍需从细胞和分子水平研究ＶＸ．６８０ 对于Ｔ２４细胞凋亡的影响，而且ＶＸ．６８０调控 ＣｙｃｌｉｎＤ１和ＣｙｃｌｉｎＢ１表达的具体机制．还需更深 入的研究。 ４参考文献 ｌ １］Ｐａｒｋｉｎ Ｍ Ｄ，Ｂｒａｙ Ｆ，Ｆｅｒｌａｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｇｌｏｂａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓ— ｔｉｃｓ，２００２［Ｊ］．ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，２００５，５５（２）：７４－１０８． ［２］Ｍａｒｕｍｏｔｏ Ｔ，Ｚｈａｎｇ Ｄ，Ｓａｙａ Ｈ．Ａｕｒｏｒａ Ａ ａ ｇｕａｒｄｉａｎ ｏｆ ｐｏｌｅｓ ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００５，５（１）：４２—５０． ３ Ｊ Ｇｉｚａｔｕｌｌｉｎ Ｆ，Ｙａｏ Ｙ，Ｋｕｎｇ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ Ａｕｒｏｒａ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ— ｈｉｂｉｔｏｒ ＶＸ一６８０ ｉｎｄｕｃｅｓ ｅｎｄ０ｒｅｄｕｐｌｉｃａｔｉ０ｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｐｒｅ￣ｒ－ ｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ ｐ５３－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｏｓｔｍｉｔｏｔｉｃ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００６，６６（１５）：７６６８— ７６７７． ４］Ｐａｒｋｉｎ Ｄ Ｍ． Ｆｈｅ ｇｌｏｂａｌ ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ Ｊ］． Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｕｒｏｌ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００８，Ｓｕｐｐｌ（２１８）：１２－２０． ５】Ｆｌｅｓｌｍｅｒ Ｎ Ｅ，Ｈｅｒｒ Ｈ Ｗ，Ｓｔｅｗａｒｔ Ａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｎａｔｉｏｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｄａｔａ ｂａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ． １９９６，７８（７）：１５０５—１５１３． ［６］Ｓｔｅｎｚｌ Ａ，Ｃｏｗａｎ Ｎ Ｃ，Ｄｅ Ｓａｎｔｉｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＥＡＵ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｎ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ ｍｕｓｃｌｅ－ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ［Ｊ］． Ｅｕｒ Ｕｒｏｌ，２００９，５５（４）：８１５—８２５． ７］Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ Ｅ Ａ，Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ Ｄ，Ｍｏｏｒｅ Ｊ，ｅｔ ａ１．ＶＸ一６８０，ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｌｘＬｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ Ａｕｒｏｒａ ｋｉ— ｎａｓｅｓ， ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ， ２００４，１０（３）：２６２—２６７． ８ １ Ａｒｌｏｔ—Ｂｏｎｎｅｍａｉｎｓ Ｙ．Ｂａｌｄｉｎｉ Ｆ．Ｍａｒｔｉｎ Ｂ．ｅｔ ａ１．Ｅｆｉｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｕｒｏｒａ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＶＸ—－６８０ ｏｎ ａｎａｐｌａｓｔｉｃ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｎ—－ ｃｅｒ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌ １ｉｎｅｓ ｆ Ｊ］． Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｌａｔ Ｃａｎｃｅｒ． ２００８，１５ （２）：５５９—５６８． ［９ｊ Ｋｉｍ Ｊ Ｋ，Ｊｕｎｇ Ｋ Ｈ，Ｎｏｈ Ｊ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｔ ’Ｓ ＬＯＯＰ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ｄｏｗｎ・・ｒｅｇｌｘＬａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙ—・ ｃｌｉｎＤ１ ａｎｄ ＣＤＫ２ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｌｘＬａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏ１，２００９，３５（６）：１２５７—１２６４． Ｌ Ｊ０：Ｗｕ Ｐ Ｐ，Ｊｊｎ Ｙ Ｌ，Ｓｈａｎｇ Ｙ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＬＣ１ ｇｅｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ＨＴ２９ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ｓｃｉ，２００９，３９（３）：２６３—２６９． ［ｉｌｊ Ｙｕａｎ Ｊ，Ｙａｈ Ｒ，Ｋｒａｍｅｒ Ａ，ｅｔ ａ１．ＣｙｅｌｉｎＢ１ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ Ｊ］ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００４，２３（３４）：５８４３—５８５２． ［１２］Ｆｕｌｌｅｒ Ｂ Ｇ，Ｓｔｕｋｅｎｂｅｒｇ Ｐ Ｔ．Ｃｅｌｌ ｄｉｖｉｓｉｏｎ：ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈｅｅｋ Ｌ Ｊ Ｊ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ，２００９，１９（１４）：１１８２—１１８７ （收稿：２０１３—０３—１９ 编辑：王耀东）