第28卷第4期 生态科学 28(4):348-351 2009年8月 Ecological Science Aug.2009 利用原子吸收光谱法和电镜能谱仪法分析重金属 Pb、Cd在水稻颖果不同部位中的分配 陈娟,孙鉴坤,方元平 黄冈师范学院生命科学与工程学院,湖北,黄冈438000 【摘要】 比较研究了传统原子吸收光谱法与电镜能谱仪法分析重金属Pb、cd在水稻籽粒不同部伍中的分配情况,研究 结果表明:两种方法均显示,Pb、Cd在水稻颖果中的分配为胚>糊粉层>果皮>近糊粉层处胚-gL>颖果中心,其中,胚、. 糊粉层和果皮Pb、Cd含量差异较小,整个胚乳Pb、Cd含量变化也不大,但胚、糊粉层和果皮Pb、Cd含量显著高于胚 乳。扫描能谱仪能够准确反映重金属在植物不同部位分布的差异,结果与原子吸收光谱法无显著差异。扫描能谱仪法的 优点在于操作方便快捷,但是只能用于定性,不能定量测定出某一部位重金属的准确含量,因此,不能代替传统的原子 吸收光谱法。 关键词:原子吸收光谱法;电镜能谱仪;Pb;Cd;水稻颖果 doi:10.39698.issn.1008—8873.2009.04.011 中图分类号:Q945 文献标识码:A 文章编号:1008.8873(2009)04.348.04 Analysis on the distribution of heavy metal Pb and Cd in rice grain by atomic absorption spectroscopy and environmental scanning electron microscopy CHEN Juan,SUN Jian.kun,FANGYuan.ping’ College oft,ife Science andEngineering,HuanggangNormal University,Hubei,Huanggang 43800 ̄China Abstract:Tradiitonal atomic absorption spectroscopy method and the environmental scanning electron microscopy method are compared in analyzing the distribution of heavy metal Pb and Cd in rice grain.Two methods show that the concentrations of Pb and Cd in different parts of rice caryopsis are in the order of embryo>aleuron layer>pericarp>external endosperm>center of caryopses.Smaller difference in the content of Pb and Cd is found in embryo,aleurone layer and pericarp;besides,little idference exists inthe whole endosperm,but the contents ofPb and Cd in embryo,aleurone layer and pericarp are signiifcantly higher htan in the endosperm.Environmental scanning electron microscopy call accurately reflect the difference of idstribution of heavy metals in diferent parts of plant,and there is no obvious diference as compared to atomic absorption spectroscopy. Environmental scanning electron microscopy method is easy and quick;however,it can only detect qualitatively but Oan not detect accurately the content ofelements in a specific part,SO it can not take the place ofthe traditional method. Key words:atomic absorption spectroscopy;environmental scanning electron microscopy;Pb;Cd;rice caryopsis 收稿日期:2009.03.10收稿,2009.08.20接受 基金项目:湖北省科技厅自然科学基金项目(2007ABA364):湖北省教育厅自然科学中青年基金项H(Q200727003);黄冈师范学院博士基金 (06CD179)资助。 作者简介:陈娟(1978—’,女,博士,讲师,主要研究水稻颖果发育生理。Email:swcM@hgnu.edu.cn ’通讯作者Emil:swfrp@hgnu.edu.ca 4期 陈娟,等:利用原子吸收光谱法和电镜能谱仪法分析重金属Pb、Cd在水稻颖果不同部位中的分配 349 试验大棚内进行。选用无Cd污染的砂壤土,土壤有 1前言(Introduction) 在受重金属污染的土壤中,作物生长迟缓、植株 矮小,叶片失绿甚至死亡,最终产量降低甚至绝收【l】, 虽然在浓度较低时不会对植物生长造成危害,但是 在植物体内的积累量会增加【2】,而且植物吸收后容易 在食用部位大量积累,进一步通过食物链危害人和 机质含量32.5 g・kg一,有效态氮含量83.8 mg・kg一,速 效磷含量40.5 mg・kg~,速效钾含量71.2 mg・kg~,土 壤风干后过筛后,向土壤中加CdCl2,使土壤中含Cd 100 mg・kg~,以不加Cd的处理为对照。土壤准备好 后分别加入塑料盆内,盆钵口径30 cm、底径20 cm、 高30 cm,每盆装土15 kg。秧苗移栽前,盆钵土面 上保持2~3 cm水层一个月,使土壤与加入的Cd进 动物【引。人体也有长期积累Pb、Cd的特性,而且Pb、 Cd在人体的降解周期长,长期食用高Pb、Cd含量 的食物,可引起人体多种疾病L4J。 水稻(Oryza sativa L.1是世界上最重要的粮食作 物之一,全世界约有一半以上的人口以稻米为主食, 稻米中重金属含量的高低直接影响着人类的健康。传 统的研究重金属在植株中积累量的方法为原子吸收 光谱仪法,而该法在消化提取过程中容易损失而使测 定结果偏低【5】。有研究表明,水稻颖果糊粉层是积累 矿质元素较多的部位,皮层和内胚乳积累矿质元素较 少【6J。然而由于现阶段没有仪器或化学方法能将籽粒 皮层和糊粉层准确地分开,也没有较好的方法提取到 单个淀粉粒,使传统的原子吸收光谱仪法无法准确显 示各部位重金属含量的差异。Joyce等采用X.能谱仪 测出小麦糊粉层和盾片细胞质中含有大量C、O、P、 K和Mg等元素,胚乳层中的P、K、Mg含量很低L7 J; 陈义芳等人也采用X.能谱仪检测出矿质元素和重金 属Pb的分布情况【5 】;李春燕等采用x一能谱仪检测 出小麦籽粒糊粉层矿质元素最为丰富。然而X.能谱 仪是否能够代替传统的原子吸收光谱仪法,优越性体 现在哪些方面还有待进一步研究 J。 本试验以扬稻6号、武运粳7号两个水稻品种为 材料,种植在人工模拟的受污染土壤中,同时采用原 子吸收光谱法与电镜能谱仪法测定分析重金属Pb、 Cd在水稻籽粒不同部位中的分配,探讨重金属Pb、 Cd在水稻籽粒和颖果各部位的分配规律,旨在为人 们食用安全的稻米提供依据。另一方面进一步证明电 镜能谱仪法在测定分析重金属元素在植物体内分布 情况中的作用。 2材料与方 ̄E-(Materials and methods) 2.1供试材料及处理 供试材料为扬稻6号和武运粳7号。盆栽试验在 行平衡。具体方法同前文¨川。 2.2测定分析方法 2.2.1原子吸收光谱法 籽粒成熟收获后,自然风干,按农业部颁布的《米 质测定方法》(NY147—88)标准,用出糙机脱壳收集 谷壳和颖果,再用精米机精加工收集糠层(果皮、种 皮、糊粉层和胚)和精米。同时留取一部分颖果先用 水浸透,在解剖镜下手工分离出果皮、糊粉层、近糊 粉层处胚乳、颖果中心和胚。将分离所得的所有样品 烘干、磨碎、过lO0目筛、称重,用HNO3和HC104 混合液(HNO3:HCIO4:4:1)消化后,用原子吸 收光谱仪(PE2100,美国)测定Pb、Cd的含量(各 部分中Pb、Cd占这部分干物重的比例,单位为 ・g ),根据各部分干物质分配的比例计算各部分 Pb和Cd的积累量。 2.2.2扫描电镜能谱仪法 Kevex扫描电镜能谱仪不仅能够扫描拍摄各种 材料表面形态,还能检测出材料表面各种元素是否存 在,同时还能够检测出各种元素相对含量的大小[5】。 试验将水稻籽粒去壳后,在体视显微镜下将颖果 沿胚部和中部横断,然后将横断后的不同部位不经其 它任何处理,横断面向上直接用导电银胶粘贴在样品 台上,脱下的颖壳也不经其它任何处理分别按外部和 内部向上用导电银胶粘贴在样品台上,在环境扫描 (荷兰飞利浦公司,XL一30型)电镜下观察并进行能 谱分析。样品室的环境条件为:冷台温度选定5℃, 样品室气压4 Torr,加速电压15 kV。上述样品在扫 描电子显微镜下观察的同时,进行x射线电子探针显 微分析。能谱仪为美国Themo公司的Kevex能谱仪, 加速电压为20 kV,速流为0.15 A,样品倾角为0o, 样品与探针之间的角度为33。,工作距离为10.0 nlln。 对样品进行点分析,测定Cd和Pb的相对含量,以 Cnffs(元素的峰值减去背景值后的每秒脉冲数)表示 元素的相对含量【5】。每种制样分别扫描6~7次。 350 生态科学Ecological Science 2.2.3数据统计分析 采用Sigmaplot2000统计软件进行相关分析,数 5.7:4.4:I.4:l。也呈现为胚、糊粉层和果皮Pb、 Cd含量差异较小,整个胚- ̄LPb、Cd含量变化也不大, 据均为多次重复测定的平均值。 3结果与分析(Results and analysis) 3.1 原子吸收光谱法测定显示Pb和Cd在颖果不同 但胚、糊粉层和果皮Pb、Cd含量显著高于胚乳。 两品种之间Pb、Cd含量差异也与原子吸收光谱 法测定结果相一致,表现为武运粳7号各部位Pb、Cd 的积累量显著低于扬稻6号。武运粳7号糊粉层中Cd 的含量比扬稻6号低32.2%,Pb的含量低47.5%。 部位的分布情况 原子吸收光谱法测定两参试品种均显示,Pb、 Cd在水稻颖果各部位含量呈现为:胚>糊粉层>果 皮>近糊粉层处胚乳>颖果中心。扬稻6号中Cd在 胚、糊粉层、果皮、近糊粉层处胚乳和颖果中心的比 例关系为:l2:8.7:6.9:1.7:1。可见,胚、糊粉 层和果皮Pb、Cd含量差异较小,整个胚乳Pb、Cd含 量变化也不大,但胚、糊粉层和果皮Pb、Cd含量显 著高于胚乳(表1)。 两品种相比,武运粳7号颖果各部位Pb、Cd积累 量显著低于扬稻6号。如武运粳7号糊粉层中Cd的含 量比扬稻6号低27.7%,Pb的含量低37.8%。表明,不 同基因型水稻品种对Pb、Cd的积累能力是不一样的。 表1原子吸收光谱法测定显示Pb和cd在颖果中的分布情 况( ・g。 ) Table 1 Content of Pb and Cd in different parts of rice caryopses by atomic absorption spectroscopy(pg・g ) 颖果部位 E一m Pe r Al E—e cC 乙 Partoffice caryopse 扬稻6号 7.54 4.36 5.46 1.06 0.63 Yangdao 6 i-O.62 士O.91 士O.82 士0.41 士0.48 武运粳7号 5.12 2.79 3.59 0.61 0.45 Wuyuniing 7 士o.72 士0.24 士0.99 士0.20 士0.18 扬稻6号 16.88 8.81 15.96 3.42 2.46 Yangdao 6 士0.57 士1.17 士1.03 土o.35 土O.37 武运粳7号 10.94 4.77 9.93 2.72 1.61 Wuyunjing 7 士0.88 士0.97土1.21 士O.12士O.17 注Note:EⅡ卜-胚(Embryo)=Pe一果皮(P ̄ricarp) ̄Al_糊粉层(Aleurone)=Ee—近糊粉 层处胚乳(Exterl ̄endosperm):Cc一颖果中心(Cencer ofearyopses) 3.2扫描电镜能谱仪测定显示Pb和Cd在颖果不同 部位的分布情况 扫描电镜能谱仪法测定两参试品种Pb、Cd在水稻 颖果各部位含量分布趋势与原子吸收光谱法测定结 果相一致(表2):胚>糊粉层>果皮>近糊粉层处 胚乳>颖果中心。扬稻6号中Cd在胚、糊粉层、果皮、 近糊粉层处胚乳和颖果中心的比例关系为:7.5: 表2扫描电镜能谱仪测定显示Pb和Cd在颖果中的分布情况 Table 2 Content of Pb and Cd in different parts of rice caryopses by environmental scanning electron microscopy 颖果部位 一Em Pe r Al Ee cc Partoffice caryopse 扬稻6号 8.44 4.98 6.39 1.56 1.12 Yangdao 6 士0.48士o.78土0.72士0.42士o-39 武运粳7号 5.82 3.16 4-33 1.12 0.78 Wuyunjing 7 士0.51 士0.54士o.88士o.31 士o.16 扬稻6号 20.64 11.55 17.58 5.42 5.06 Yangdao 6 士0.52 士1.22 士1.21 士o.31 i-O.25 Pb 一 武运粳7号 12.87 5.62 9.23 3.72 3.21 Wuyunjing 7 士o.74士O.87士1.44士O.18士0.54 注Note:符号同上表:Symbolsmeansthe same 8smentionedabove; Pb、Cd在颖果不同部位的相对含量以各元素峰值减去背景值后的每秒脉冲敷表示。 Relative content is represented by the difference between pcak pulses in one∞e and base pulsesinone see. 5 lO l5 20 谱法显示Pb、Cd在颖果不同部位的分布 值 fPb andCdin rice caryops ̄sby atomic 图1扫描电镜能谱仪法与原子吸收光谱法显示Pb和Cd在 颖果不同部位的分布情况的关系 Fig.1 The relationship between Content of Pb and Cd in different parts of rice caryopses measured by environmental scanning electron microscopy and that by atomic absorption spectroscopy 相关分析结果表明(图1),扫描电镜能谱仪法所测 Pb和Cd在颖果不同部位的分布情况与原子吸收光谱 法所测结果呈正相关,相关性达到极显著水平(r= 4期 陈娟,等:利用原子吸收光谱法和电镜能谱仪法分析重金属Pb、Cd在水稻颖果不同部位中的分配 351 0.9860**)。表明,扫描电镜能谱仪法能够准确反映 重金属元素Pb和cd在颖果不同部位的分布趋势。 4讨论(Discussion) 4.1糊粉层是积累重金属Pb、Cd的主要部位 水稻籽粒由谷壳和颖果组成。颖果也叫糙米,由 参考文献(References) 川1 Liu J,Li K,Xu J, a1.2003.Interaction of Cd and five mineral nutrients for uptake and accumulation in different rice cultivars and genotypes[J].Field Crop Res,83(3): 271.281. 子房发育而来,包括胚、胚乳(包括糊粉层)、果皮 【2 2】蔡保松,张国平.2002.大、小麦对镉的吸收、运输及在 和种皮四个组成部分,内含大量的淀粉、蛋白质等贮 藏物质,构成了水稻籽粒的主要部分 】。 王忠等认为,胚乳表层细胞形成糊粉层与其积累 矿质元素、脂类等物质有关。他指出由背部维管束卸 至退化珠心层的营养物质,除含有可溶性糖、氨基酸 外,还含有P、K、Mg、Ca矿质元素、脂类等。胚乳 的表层细胞吸收这些营养物质时,把可溶性糖和氨基 酸运入内胚乳细胞供合成淀粉与蛋白质,而矿质元 素、脂类等物质被留在表层细胞中,使表层细胞富含 矿质元素和脂类,矿质元素在液泡中形成植酸钙镁颗 粒,成为糊粉粒构成成分,脂类积聚在圆球体中,从 而使表层细胞演化成糊粉细胞 J。同时王忠也认为水 稻糊粉层是“积累灌浆”废物的部位,矿物质主要集中 在这一层 j。本试验结果表明,Pb、Cd浓度在糠层中 明显大于精米,证明了王忠等的观点。 4.2如何尽量减少有害重金属元素的摄入 世界卫生组织(WHO)推荐成人每日摄入Cd的 量最大为60 ̄70 ,同时还提出国际粮食市场交易 的粮食中Cd含量不得超过0.I ・g-l[1l】。美国对小麦籽 粒的调查发现,生长在非污染土壤上的小麦,籽粒中 也存在cd的积累,含量在0.002"--0.207 g・g~,一些 试样超出了WHO提出的0.1 Ixg・g。的安全食用上限, 说明即使小麦生长在非污染的土壤上,也可能因为受 到大气等Cd污染源的污染而使植物中Cd的含量超出 可安全食用的标准【】 l。本试验表明,重金属Pb、Cd 在糊粉层中含量较高,而在精米中含量相对较少些, 但是通过尽量去除糊粉层食用精米的方法降低食用 稻米中重金属元素的摄入量,将同时会降低其他营养 元素的摄入,从而降低稻米的营养价值,因此,在实 际生活中,如何降低糊粉层中有害重金属元素的摄入 量,同时不降低其他营养元素的摄入是一个值得研究 的课题。另外,品种之间积累重金属Pb、Cd能力也 存在差异,选择重金属积累较少的品种来种植和食用 也许是一个较好的办法。 籽粒中的积累[J】.麦类作物学报,22(3):82—86. 13J Obata H,Umebayashi M.1997.Effects of cadmium on mineral nutrient concentrations in plnats differing in tolerance ofr cadmium[J].dPlant Nutr,20:97—105. 【41 Jackson A P,Alloway B J.1992.The transfer of cadmimu from agriculture soils to the human food chain[M].In: Adriado DC(Ed).Biogeochemistry of Trace Metals.Boca Raton:Lewis Publiishers,109-158. 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