2010年10月
第10卷
中国食品学报
JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnology
Vol．10No．5Oct．2010
香椿叶总黄酮含量测定方法研究
李秀信1
（1西北农林科技大学林学院
摘要
2
张院民2
理学院
陕西杨凌712100）
为了解决NaNO2-Al（NO3）3法测定香椿总黄酮含量时数据偏高的问题，将NaNO2-Al（NO3）3法与AlCl3法
作比较。结果表明：NaNO2-Al（NO3）3法比AlCl3法测定的香椿总黄酮含量高59.96mg/g。AlCl3法可消除干扰，提高数据的准确度，其适宜酸度pH≥5.5，干扰试验的平均误差为0.007mg，测定回收率98.54%，样品测定的相对标准差为0.468%。关键词文章编号
椿叶；总黄酮；多酚类
1009-7848（2010）05-0243-06
香椿为楝科高大落叶乔木，因其嫩芽有特殊香气而得名，是我国特有速生用材树种。香椿叶含有黄酮类化合物[1]。黄酮含量的测定方法有多种，如可见区络合法[2-3]、液相色谱法[4]、荧光法[5]、化学发光法[6]等。用于测定总黄酮的方法是可见区络合法。液相色谱主要用于单一黄酮化合物的测定。络合法的化学原理是：金属离子与酮羰基、邻位羟基形成配位化合物，使吸收带发生位移。可见区络合法与被测液的成分有很大关系，络合剂及酸度的选择非常重要。由于香椿叶的颜色较重，多酚类物质含量较高，因此，不适宜的测定方法会造成较大的误差。本文对可见区亚硝酸钠-硝酸铝法与可见区三氯化铝法进行比较分析。
1.21.2.1
黄酮的两种测定方法
NaNO2-Al（NO3）法精密称取105℃烘至恒
重的芦丁0.1000g，用70%乙醇溶解，摇匀，定容
至100mL。取10mL此标准液于100mL容量瓶中，稀释、定容为0.1mg/mL芦丁标准品溶液，备
用。分别吸取芦丁标准液0.00、0.25、0.5、1.0、2.0、
3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，用70%乙醇稀释至5.0mL，先加入5%NaNO20.3mL，摇匀，静置6min，再加入5%Al（NO3）30.3mL，摇匀，静置6min，最后加入4%NaOH4mL，并用70%乙醇水
溶液定容至刻度，摇匀，静置12min，于波长504
nm处测定吸光度。以吸光度值（Y）为纵坐标，显色液中芦丁质量浓度X（mg/mL）为横坐标，用最小二
乘法进行回归，线性方程Y=1.1299x-0.0017，相关系数R2=0.9992。
1
1.1
材料与方法
试剂与仪器
芦丁，北京化学试剂公司。
傅立叶变换红外光谱仪（M-21730型）、紫外-
1.2.2三氯化铝法分别吸取芦丁标准液0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL于25mL比色管中，加入1.5%AlCl38mL和醋酸-醋酸钠缓冲液（pH5.5）4mL，用70%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，静置0.5h，于415nm处测定吸光度。以吸光度值Y为纵坐
标，显色液中芦丁质量浓度X（mg/mL）为横坐标，用最小二乘法进行回归，线性方程为Y=1.0395+
可见分光光度计（λ-217型），美国P-E公司；精密
pH计（PHS-3C-11A型），中国上海雷磁新泾仪器
公司。
0.0055X，R2=0.9991。1.3香椿叶样品处理
收稿日期：2009-12-30
作者简介：李秀信，女，1964年出生，硕士，副教授
香椿叶：不同生长期（5月30日、6月20日、
7月1日、8月20日、9月10日及9月30日）的香椿叶于2008年采自西北农林科技大学南校区
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中国食品学报
2010年第5期
家属院内，阴干，粉碎。确称取10.00g香椿叶于锥形瓶中，按1∶20的固液比加入70%乙醇溶液，60
称取香椿叶50.00g，加入250mL石油醚浸泡30min，抽滤，弃醚液，加入500mL70%乙醇溶液，60℃回流提取5h。抽滤，减压浓缩至一定体积，滤液转移至分液漏斗中，用等体积乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩除乙酸乙酯，烘干，得黄褐色晶体。采用KBr压片法绘制红外光谱图（见图1）。
℃水浴提取5h。抽滤，滤液转移到100mL容量瓶中，70%乙醇溶液定容。
2
2.1
结果与分析
红外光谱法鉴定香椿叶的提取物
9080706050吸光度403020100-10-204000
3500
3000
2500波数/cm-1
（a）
200015001000500
908070605040吸光度3020100-10-20-304000
3500
3000
2500波数/cm（b）
-1
200015001000500
图1香椿叶黄酮提取物（a）和芦丁（b）的红外光谱图
Fig.1InfraredspectraofextractedsubstanceinleavesofToonasinensis（a）andruitin（b）
第10卷第5期香椿叶总黄酮含量测定方法研究
245
图5a中，在波数3403cm-1（图5b在3424动。图5a中，羟基波数较低，峰型较宽，说明香椿叶的黄酮类物质羟基缔合程度强于芦丁。结合图
cm-1）处为羟基的伸缩振动吸收峰，1705cm-1和1654cm-1（图5b中在1655cm-1）处为羰基伸缩振
动吸收峰。从1654cm-1到1446cm-1（图5b中在
5a中1705cm-1处存在羰基吸收峰，说明香椿叶
提取物中含有酚酸类物质。综上所述，香椿叶的提取物为黄酮类化合物。
1655、1602、1504cm-1处的吸收峰为苯环骨架的
呼吸振动），从1359cm-1到1100cm-1的多个吸收峰为酚的碳氧伸缩振动和羟基的弯曲振动。
2.2
表1。
两种黄酮测定方法的比较
NaNO2-Al（NO3）3法与AlCl3法测定结果见
800cm-1附近的吸收峰为苯环上碳氢键的弯曲振
表1
NaNO2-Al（NO3）3法与AlCl3法测定结果比较
原料
Table1ComparisonofdeterminationrusultonNaNO2-Al（NO3）3andAlCl3method
方法
·AlCl3/mgg-1
·g-1NaNO2-Al（NO3）3/mg误差/mg·g-1
5月30日17.9082.8559.95
6月20日18.0084.1061.11
7月1日18.7582.8459.09
8月20日21.5687.3560.79
9月10日22.3486.2458.9
9月30日23.7288.6559.93
由表1可知，NaNO2-Al（NO3）3法的测定结果偏高，约59.96mg/g，而用AlCl3法得出的结果则相对偏低。
定。准确移取0.1mg/mL芦丁3.0mL，7份，分别加入0.1mg/mL鞣酸溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、
2.3干扰试验
香椿叶中含有大量的酚类物质，为明确AlCl3
3.5mL，再依次加入8mL0.1mol/LAlCl3和4mL
醋酸-醋酸钠缓冲液（pH5.5），用70%乙醇溶液定
容，试验结果见表2。结果芦丁测定值与实际值略有差异，平均误差0.007mg。随着鞣酸量的增加，芦丁测定值无上升趋势，因此用AlCl3方法测定香椿叶中的黄酮含量，不受酚和酸类物质的影响。
法是否受酚类物质影响，做如下试验。以芦丁为被测试样，鞣酸为干扰剂（鞣酸是酚类物质的代表，含有邻位多羟基酚），按标准曲线的测定方法测
表2鞣酸对试验结果的影响
鞣酸加入量/mL
Table20.5
芦丁加入量/mg芦丁测定值/mg误差/mg
Effectoftanninacidonexperimentalresult1.00.3000.3020.002
1.50.3000.3050.005
2.00.3000.2980.002
2.50.3000.3110.011
3.00.3000.2840.016
3.50.3000.2900.010
0.3000.3040.004
2.4酸度的影响
分别配制pH3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5和6.0
吸收峰位置逐渐红移，当pH值大于5时，最大吸收峰位置稳定，位于波长415nm处，即最大吸光度值且稳定。用酸度计对缓冲溶液和显色后的测试液进行测试，结果发现pH值大于5.5时，测试液与缓冲溶液的差值最小。选定pH5.5作为测定用缓冲溶液酸度。
醋酸-醋酸钠缓冲溶液。吸取2mL0.1mg/mL芦丁标准溶液和1.5%AlCl38mL5份，分别加入不同pH值的醋酸-醋酸钠缓冲溶液，70%乙醇溶液定溶。试验结果表明，随着溶液酸度的降低，最大
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中国食品学报
回收率试验
取9月30日香椿叶为试样，平行量取5份，
2010年第5期
2.5mg/mL芦丁标准物质，AlCl3比色法测定，测定结
果列于表3。平均回收率98.54%。
每份5mL，分别加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL0.1
表3AlCl3比色法测定黄酮的回收率试验结果
样品号
Table3
1
样品含量/mg加入芦丁量/mg理论值/mg测定值/mg回收率%
RecoverytestingresultsofflavonedeterminationbyAlCl3method
223.7180.2023.91823.32597.52
323.7180.3024.01823.75698.91
423.7180.4024.11823.85098.89
523.7180.5024.21823.90098.69
23.7180.1023.81823.50098.67
2.6精密度试验
取9月30日香椿叶为试样，平行量取5份，
可以看出，用AlCl3比色法测定香椿中的总黄酮，标准差0.1110mg/g，说明该方法重现性好。
每份5mL，AlCl3比色法测定，结果如表4所示。
表4AlCl3比色法测定黄酮的精密度试验结果
样品3
样品4
样品5
平均值
标准差/mg
相对标准差/%
Table4
样品1
总黄酮含量/mg
PrecisiontestingresultsofflavonedeterminationbyAlCl3Method
样品2
23.64123.83423.83423.59323.68923.7180.11100.468
3讨论
硝酸铝比色法测定黄酮的主要依据是铝离子
色法测定黄酮含量。香椿中的黄酮类化合物目前发现几种[8]，如图2所示。香椿中的黄酮类化合物均在3位（或5位）上含有羟基，因此可用硝酸铝比色法测定香椿中的总黄酮。
（Al3+）与黄酮母核中的3位（或5位）上的羟基和
4位羰基配合形成稳定结构[7]（图1），从而可用比
图2Al3+与黄酮母核中3位（或5位）羟基和4位羰基形成的稳定结构
inmothernucleusofflavonoids
Fig.2StablestructureformedbetweenAl3+and3（or5）hydroxyland4-carbonylgroups
第10卷第5期香椿叶总黄酮含量测定方法研究
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此外，邻二酚类化合物也可与Al3+形成稳定结构（图3），从而干扰测定。香椿中的邻二酚类化合物主要为羟基苯甲酸类（原儿茶醛、原儿茶酸）、花青素类等。这些化合物具有邻二酚类结构，显色反应后在波长504nm处有强吸收。因此，直接用硝酸铝比色法测定香椿中的黄酮含量时，邻二酚类化合物会对测定结果产生正性干扰，导致测定结果偏高。
合物的典型结构）时，AlCl3与之生成黄色的黄酮铝配合物[9]，从而定量显色；而在酸性环境下，只与酮羰基和其邻位羟基发生络合，反应如下：
AlCl3法反应原理：黄酮分子母核上有3-OH或5-OH，当B环上有邻位二羟基（这是黄酮类化
AlCl3法测定时，芦丁等黄酮类物质反应强烈，对黄酮类化合物的专属性较强，因此，选用Al-
Cl3法定量测定香椿叶中的黄酮。
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中国食品学报
2010年第5期
参
[1][2][3][4][5][6][7][8][9]
考文献
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StudiesontheDeterminationMethodofTotalFlavoneContentinToonaSinensis
LiXiuxin1ZhangYuanmin2
（1CollegeofForesty
2
Collegeofscience，NorthwestSci-TechUniversityofAgricultureandForestry，
Yangling712100，Shaanxi）
AbstractInordertosolveaproblemofresultdeviationofflavonecontentinToonasinensisleaf.Acomparison
wasmadefordeterminationofflavonesinToonasinensisleafbybothNaNO2-Al（NO3）3methodandAlCl3method.ItconcludedthattheresultofNaNO2-Al（NO3）3methodwashigherabout59.96mg/gthanthatofAlCl3method.AlCl3methodcaneliminatetheinterferenceandimprovetheaccuracy.ThefittestpHis5.5.Experimentandresearchoninter-ferenceindicatesthataverageerrorsis0.007mgandtherecoveryis98.54%.Relativestandarddeviationofsamplede-tectionis0.468%.
Keywords
Toonasinensisleaf；flavone；polyphenols
美国批准肉毒杆菌素治偏头痛
据新加坡《联合早报》报道，美国食品和药物管理局已批准艾尔建(Allergan)公司的抗皱纹注射剂肉毒杆菌素(Botox)用来治疗慢性偏头痛。
药管局当地时间15日发表的声明说，为了缓解头痛，患有慢性偏头痛的成年人可以每3个月接受一次肉毒杆菌素的注射。
药管局还说，对那些每个月头痛次数只有14天或少于14天的人，注射肉毒杆菌素没有疗效。
英国在今年7月成为全球第一个允许把肉毒杆菌素用来治疗偏头痛的国家。
（消息来源：新浪网）
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