SMYD3和MMP9在结肠癌中的表达与临床意义

SMYD3和MMP-9在结肠癌中的表达与临床意义

李卫奇1贾喜花1赵霞1王晓博1宋泰宁2

(1.河北省保定市第一中心医院，河北保定067000 ; 2.承德医学院，河北承德 071000)

[摘要]

探讨组蛋白甲基化酶-3(SMYD3)和基质金属蛋白酶-9(MMP -9)在结肠

采用免疫组化MaxVision法检测SMYD3和MMP -9蛋白在72例5皿丫03和皿皿卩-9在结肠癌组织的阳性表达率（59.7%,61.1%)显著

癌中的表达及临床意义。

结肠癌组织和36例癌旁组织中的表达情况，并对SMYD3及MMP -9的表达水平与临床病理特征 及相关性进行分析。

高于癌旁组织（16.7%,19.4%))/}均<0.05);结肠癌组织中5皿丫03和皿皿卩-9表达与淋巴结转 移、浸透深度及TNM分期有关均<0.05),与年龄、性别及分化程度无关均>0.05);在结肠 癌组织中SMYD3和MMP-9表达呈正相关（r=0.274,P<0.05)。

SMYD3及MMP - 9与结

肠癌发生发展密切相关，联合检测二者可能对预测结肠癌恶性程度和评估预后有重要价值。

[关键词]

SMYD3;MMP-9;结肠癌；免疫组化

R75.35 [文献标识码]

B [文章编号]

1008 -884 (019) 06 -0654 -03

doi:10.3969/j.issn. 1008 -8849.2019.06.024[中图分类号]

结肠癌是胃肠道系统中常见的恶性肿瘤，其在 未发生转移前往往可以通过手术治愈，而90%以上 的患者死因为局部复发和远处转移[1]。因此，探究 结肠癌细胞迁移侵袭机制对患者的治疗和预后有着 重要意义。组蛋白甲基化酶-3 (SET ad MYND domain - containing protein 3 , SMYD3 )为 RNA 多聚 酶复合物的成员之一，通过调控下游靶基因的转录， 在分子水平影响细胞的黏附、浸润及迁移等生物学 行为，参与癌症的发生发展[2-4]。目前研究发现， SMYD3在前列腺癌、乳腺癌及膀胱癌等多种肿瘤中 过表达，并与肿瘤的局部浸润与远处转移呈正相 关[5-7]。MMP -9属于基质金属蛋白酶家族（matrix metalloproteinases , MMPs )的重要成员，主要作用是 降解细胞外基质成分，调节细胞黏附,参与形成新血 管，在癌细胞的浸润过程中发挥重要作用[8 ]。本研 究应用免疫组化法联合检测SMYD3及MMP - 9在 结肠癌组织的表达，并研究二者与临床病理征的关 系及相关性，旨在探究SMYD3及MMP -9在结肠 癌发生发展及预后评估中的作用。1

临床资料

1.1 一般资料选取保定市第一中心医院2015年 1月一2016年12月经手术切除且病理诊断为结肠 腺癌的组织蜡块72例。所选患者中男38例，女34

[通信作者]贾喜花，E - mail: jiaxihuade@163. com

例；年龄28 ~ 82岁，中位年龄56岁；高分化26例， 中分化31例，低分化15例；浸润深度T一T: 34例， T+T4 38例；淋巴结转移阳性33例，阴性39例；采 用2010年AJCC(美国联合癌症分类委员会）和 UICC(国际抗癌联盟）修定的TNM分期：I ~ ：^期 40例，III~ IV期32例。患者手术前均未行任何抗 肿瘤治疗。另取36例癌旁组织（距肿瘤边缘>5 cm)为对照，经病理检查证实为正常组织，所选研究 对象包括男1例，女17例；年龄28 ~ 79岁，中位年 56

。

1.2试剂和方法免疫组化采用MaxVio法染 色。兔抗人SMYD3抗体购自美国SAB公司，稀释 浓度1:50;鼠抗人MMP -9单克隆抗体工作液、通 用免疫组织化学MaxVio试剂盒和DAB显色试剂 购自福州迈新生物技术开发有限公司。具体染色步 骤严格按照试剂盒说明书进行操作，取已知阳性组 织切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。 1.3结果判定 SMYD3阳性表达为棕黄色颗粒， 位于细胞核及细胞浆。MMP-9阳性表达也为棕黄 色颗粒，位于细胞浆。所有切片均为2位病理科医 师在双盲情况下进行计分。SMYD3:每例标本随机 观察5个（x 400倍）高倍视野，计数阳性细胞数占 细胞总数的百分比（阳性细胞百分率）<1%、％ ~ 25%、26% ~50%、51% ~75%、>75% 分别得 0,1，

现代中西医结合杂志 Modern Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine 2019 Feb，28(6)• 655 •

2,3,4分。②依照显色强度：未着色、浅黄色、棕黄 色、棕褐色分别得0, ,2,3分;根据①x②两项乘积 结果，设0 ~4分为阴性,4分以上为阳性。MMP -9: ①每例每个指标随机观察5个（x400倍）高倍视 野，计数阳性细胞数占细胞总数的百分比（阳性细 胞百分率）：<5%、5% ~25%、26% ~50%、51% ~ 75%、>75%分别得0,1,2,3,4分；②依照显色强 度：未着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别得0,1,2,3 分;根据①x②两项乘积结果，设0 ~ 1分为阴性，2 ~4 分为弱阳性（+ ) ,5 ~ 8分为阳性（++ ) ,9 ~ 12分为 强阳性（出）。1. 4

统计学方法采用SPSS 19. 0统计学软件进

2达

结 果

2.1 SMYD3和MMP -9在结肠癌和癌旁组织的表

SMYD3和MMP -9在结肠癌组织的阳性表达 率分别为 59. 7% (43/72) ,61. 1% (44/72),癌旁组 织中分别为 16. 7% (6/36) ,19. 4% (7/36),二者在 结肠癌组织的阳性表达率显著高于癌旁组织（X2 = 17.950,P <0.05；%2 =16.718,P<0.05)。

2.2 SMYD3和MMP-9表达与临床病理特征的关 系结肠癌组织中SMYD3和MMP -9的表达与性 别、年龄及分化程度无关均>0.05),与TNM分 期、浸透深度及淋巴结转移有关均<0. 05): SMYD3和MMP-9阳性表达率均为有淋巴结转移 高于无淋巴结转移，浸透深度T一T4高于T一T2,

tnm分期m ~

行统计分析，计数资料比较采用X2检验，相关性行 Spearman等级相关分析，_P <0.05为差异有统计学

。

]V期高于I ~ ：^期。见表1。

2.3 SMYD3和MMP-9的表达在结肠癌中的关系

表1 SMYD3和MMP-9在结肠癌中的表达与临床特征的关系

SMYD3

临床特征

阳性率/% (例/例）

男女<60岁

38344626403226311534383933

60.5(23/38)58.8(20/34)58.7(27/46)61.5(16/26)47.5(19/40)75.0(24/32)61.5(16/26)61.3(19/31)53.3(8/15)44.1(15/34)73.7(28/38)43 6(17/39)78. 8(26/33)

0.011

T3 — T4无有

76.3(29/38)41.0(16/39)84.8(28/33)

0.8510.0180.83

P

MMP -9

阳性率/% (例/例）57.9(22/38)64.7(22/34)67.4(31/46)50.0(13/26)45.0(18/40)81.3(26/32)50.0(13/26)67.7(21/31)66.7(10/15)44.1(15/34)

0.0050.3470.0200.554P

性

年龄

0. 810. 146

言60岁I ~ 1期m ~賴高分化

TNM分期

分化程度中分化分化T1 一 T2

浸透深度

淋巴结转移0.0020.000

在结肠癌组织中SMYD3与MMP -9表达呈正相关 (=0.274,P<0.05)。见表 2。

表2 SMYD3和MMP-9的表达在结肠癌的关系例

MMP -9

项目

+

P

+ 3113

-1216

0.274

0.020

蛋白水解酶对细胞外基质的降解作用在整个浸润过 程发挥着至关重要作用。SMYD3基因位于人染色 体lq44,由16个外显子组成，具有甲基化组蛋白功 能，通过结合下游靶基因启动子的特异性DNA序 列，使染色体组蛋白（H3K4)发生二次或三次甲基 化，进而调节靶基因转录。SMYD3通过改变原癌基 因、信号转导相关基因或细胞周期调节基因等参与 细胞增殖过程的关键环节[9];甲基化MAP3K2加强 MAP激酶信号传导，导致RAS癌基因启动，促进癌 症的发生发展[4];参与MMP、VEGF及上皮间质转 化相关因子等转移相关因子的转录表达[2]。 SMYD3在多种恶性肿瘤中过表达[5-7],并与患者的

SMYD3

3讨 论

肿瘤的难治性主要归因于癌细胞的浸润与转 移，而癌细胞的浸润与转移是密不可分相互关联的 两个方面，浸润是转移的基础，转移是浸润的结果。 癌细胞的浸润过程主要涉及黏附、降解和移动，其中

• 656 •现代中西医结合杂志 Modern Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medic

疾病恶性程度及预后差密切相关。本研究结果显 示，SMYD3在结肠癌组织的阳性表达率（59.7% )显 著高于癌旁组织（6. 7%),提示SMYD3在结肠癌 的起始阶段发挥重要作用；临床病理特征分析的结 果显示，在结肠癌组织中SMYD3表达与浸透深度、 TNM分期及淋巴结转移有关，并且浸透深度越深、 TN M分期越晚及有淋巴结转移的结肠癌组织， SMYD3阳性表达率越高，进一步提示SMYD3在结 肠癌的发生及侵袭迁移过程中起重要作用。

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sine Methylation of Map3 k2 to Ras-Driven Cancer [ J ]. MMPs家族是在细胞外基质中发现的一组锌离 子依赖性蛋白质，目前至少已发现26种MMPs, MMP-9作为MMPs家族的重要成员，产生于正常 组织细胞（如内皮细胞、结缔组织细胞、淋巴细胞、 中性粒细胞、巨噬细胞等）和肿瘤细胞。研究表明， M M P s在正常组织表达较少，而在肿瘤组织呈高表 达状态，并且与肿瘤患者不良分期及预后差有 关[10-11]。MMP-9的主要功能是降解明胶及W、 V、M和XW胶原，破坏肿瘤微环境中的基底膜和细 胞间基质,调节癌细胞生长及血管生成，在癌细胞迁 移和侵袭过程中起着重要的作用。本研究发现， MMP - 9在结肠癌组织的阳性表达率（61. 1 % ,44/ 72)高于癌旁组织（19. 4% ,7/36),而且MMP - 9表 达与浸透深度、TNM分期、淋巴结转移有关，与患者 年龄、性别及分化程度无关，进一步证实MMP-9 在结

发 过 发 重要

结

的疾病

恶性程度及侵袭能力相关，可能成为结肠癌患者预 后评估的重要标记物。

MMP-9作为SMYD3调节的下游靶基因，对 SMYD3发挥促转移特性具有重要作用。既往研究 显示，SMYD3可能通过特异性结合MMP - 9的启动 子，增强MMP-9的表达，最终促进癌症的浸润转 移[12-13]。本研究结果显示，在结肠癌组织中 SMYD3与MMP - 9呈正相关，说明在结肠癌中 SMYD3可能通过调控MMP -9的表达而促进结肠 癌细胞侵袭、转移作用。

综上所述，在结肠癌发生发展及浸润转移过程 中可能存在SMYD3及MMP-9相互作用，因此联 合检测这2种蛋白在结肠癌中的表达水平可能有助 于判断患者的疾病恶性程度及预后评估。

[

参

考

文

献

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[收稿日期]2017-12-01

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