第４０卷 第１期
２０１９年０２月
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＭｕＤａｎＪｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖｏｌ４０ Ｎｏ１ ２０１９
牡丹江医学院学报 Ｆｅｂ２０１９
ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌中的表达及其生物学功能
吴克盛ꎬ符清胜ꎬ赵 军ꎬ赵国海
(皖南医学院第一附属医院弋矶山医院胃肠三科ꎬ安徽 芜湖 ２４１００１)
摘要: 目的 检测ｍｉＲ－４１１－５ｐ(ｈｓａ－ｍｉｃｒｏＲＮＡ－４４１－５ｐ)在胃癌组织及胃癌细胞中表达情况以及对胃癌细胞功能的影响ꎮ方法 采用ｑ－ＰＣＲ检测４８对胃癌及癌旁组织、人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３、ＢＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１、ＡＧＳ以及人胃粘膜上皮细胞株ＧＥＳ－１中ｍｉＲ－４１１－５ｐ的表达水平ꎻ采用ｍｉＲ－４１１－５ｐｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｍｉｍｉｃ或ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ转染表达差异最显著细胞后ꎬ通过平板克隆、ＣＣＫ－８法、流式细胞仪检测ｍｉＲ－４１１－５ｐ对胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响ꎮ结果 胃癌组织中ｍｉＲ－４１１－５ｐ的相对表达量(０.５０±０.２５)明显低于癌旁组织(１.１９±０.４４ꎬｔ＝－９.５５ꎬＰ<０.０１)ꎻ与胃正常上皮细胞ＧＥＳ－１(０.９０±０.１５)中的ｍｉＲ－４１１－５ｐ相比ꎬ人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３(０.３９±０.０８ꎬｔ＝９.３３ꎬＰ<０.０１)、ＢＧＣ－８０３(０.５５±０.１５ꎬｔ＝５.２１ꎬＰ<０.０１)、ＳＧＣ－７９０１(０.５８±０.０７ꎬｔ＝６.０３ꎬＰ<０.０１)、ＡＧＳ(０.６６±０.１０ꎬｔ＝４.０２ꎬＰ<０.０１)表达相对较低ꎻＢＧＣ－８２３细胞过表达ｍｉＲ－４１１－５ｐ后ꎬ细胞中ｍｉＲ－(１１９.６０±１９.２３)克隆形成能力较阴性对照组(２２２.４０±２４.８２)及空白对照组(２４２.６０±１７.３９)明显减弱(Ｆ＝５０.６７ꎬＰ<００１)ꎬＣＣＫ－４１１－５ｐ的表达(４.００±０.５９)较阴性处理组(０.８６±０.０６)或空白对照组(０.９５±０.２７)明显增高(ｔ＝－１５.９０、－１５.５２ꎬＰ<０.０１ꎬ转染组８实验亦显示其增殖能力明显减弱ꎬ细胞凋亡实验显示转染组凋亡率(８.７２±０.６６)％较阴性对照组(１.２１±０.１８)％及空白对照
组(１.１０±０.２７)％略微上升(Ｐ<０.０１)ꎻ转染组跨膜细胞数(３４８.８０±２４.１３)较阴性对照组(９０８.４０±５７.９４)和空白对照组显著减少(９５２.２０±５１.３０ꎬＦ＝２５０.０７ꎬＰ<０.０１)ꎮ结论 在胃癌组织和细胞中ꎬｍｉＲ－４１１－５ｐ是一个抑制性ｍｉＲＮＡꎬ其表达水平下调参与了胃癌的发生和发展ꎬ有可能成为胃癌生物靶向治疗的新靶点ꎮ
关键词: 胃癌ꎻｍｉＲ－４１１－５ｐꎻ细胞功能
中图分类号:Ｒ３４ 文献标识码:Ａ 文章编号:１００１－７５５０(２０１９)０１－０００４－０５
ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｉＲ－４１１－５ｐｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＷＵＫｅ－ｓｈｅｎｇｅｔａｌ
(ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙꎬＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅꎬＷｕｈｕ２４１００１ꎬＣｈｉｎａ)
ｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓꎬａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｍｉＲ－４１１－５ｐｉｎｇａｓ￣ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌａｔｓｃｒｅｅｎｃｌｏｎｉｎｇꎬＣＣＫ－８ａｎｄｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｆｔｅｒｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｍｉｒ－４１１－５ｐｅｘｐｒｅｓ￣
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ－４１１－５ｐ(ｈｓａ－ｍｉｃｒｏＲＮＡ－４４１－５ｐ)ｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｇａｓ￣
ｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎬａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓꎬｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｏｆｈｕｍａｎ(ＢＧＣ－８２３ꎬＢＧＣ－８０３ꎬＳＧＣ－７９０１ꎬＡＧＳ)ａｎｄｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅｓＧＥＳ－１ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑ－ＰＣＲ.ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉＲ－４１１－５ｐｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｓｉｏｎｍｉｍｉｃｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ.Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉｒ－４１１－５ｐｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓ(０.５０±０.２５)ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎａｄｊａｃｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓ(１.１９±０.４４ꎬｔ＝－９.５５ꎬＰ<０.０１).Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍｉｒ－４１１－５ｐｉｎｎｏｒｍａｌｇａｓｔｒｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＧＥＳ－１(０.９０ｏｆｍｉＲ－４１１－５ｐｉｎＢＧＣ－８２３ｃｅｌｌｓꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉＲ－４１１－５ｐｉｎｃｅｌｌｓ(４.００±０.５９)ｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｔｒｅａｔ￣ｍｅｎｔｇｒｏｕｐ(０.８６±０.０６)ａｎｄｔｈｅｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(０.９５±０.２７).Ｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ(１１９.６０±１９.２３)ꎬｔｈｅｃｌｏｎａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎａ￣ｂｉｌｉｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(２２２.４０±２４.８２)ａｎｄｔｈｅｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(２４２.６０±１７.４)(Ｆ＝５０.６７ꎬＰ<０.０１)ｔｈｅＣＣＫ－８ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｏｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙꎬａｎｄｔｈｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｅｘｐｅｒ￣ｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｃｅｌｌｓꎬｍｉｒ－４１１－５ｐｗａｓａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｍｉＲＮＡꎬａｎｄｉｔｓｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｗａｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｏｃｃｕｒ￣ｒｅｎｃｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎬｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｃｏｍｅａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｔａｒｇｅｔｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ.
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ: ＧａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒꎻｍｉＲ－４１１－５ｐꎻＣｅｌｌｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎｓ
ｉｍｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｃｅｌｌｓ(３４８.８０±２４.１３)ｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(９０８.４０＋５７.９４)ａｎｄｔｈｅｂｌａｎｋｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ(９５２.２０±５１.３０ꎬＦ＝２５０.０７ꎬＰ<０.０１).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｎｇａｓｔｒｉｃ
±０.１５)ꎬｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＢＧＣ－８２３(０.３９±０.０８ꎬｔ＝９.３３ꎬＰ<０.０１)ꎬＢＧＣ－８０３(０.５５±０.１５ꎬｔ＝５.２１ꎬＰ<０.０１)ꎬＳＧＣ－７９０１(０.５８±０.０７ꎬｔ＝６.０３ꎬＰ<０.０１)ꎬＡＧＳ(０.６６±０.１０ꎬｔ＝４.０２ꎬＰ<０.０１)ｓｈｏｗｅｄｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｌｏｗｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ.Ａｆｔｅｒｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
作者简介:吴克盛(１９９３－)ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向:胃肠外科学ꎮ 通讯作者:赵国海ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｈａｏｇｕｏｈａｉ＠１６３.ｎｅｔꎮ
２０１９年０２月 牡丹江医学院学报
第４０卷 第１期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＭｕＤａｎＪｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖｏｌ４０ Ｎｏ１ ２０１９
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瘤 ꎬ亦是我国致死率第二的病因胃癌是全球发病率第五、死亡率第三的恶性肿ꎬ然而其早期筛查与治疗的特异性分子靶点尚未明确ꎬ仍需要多因素综合评估[１－２]抑癌通路来影响癌症的发生和发展ꎮ异常表达的ｍｉＲＮＡ通过调控致癌或ＲＮＡꎬ因此ꎬ研究微和发展(ｍｉＲＮＡｓ)ｍｉＲꎬ将会为其诊断和治疗提供新的靶点的功能ꎬ特别是有关于胃癌的发生ꎮ目前腺癌－、４１１非小细胞型肺癌－５ｐ已在部分癌症中进行了相关研究、肾细胞癌、宫颈癌、结肠癌ꎬ乳、膀胱癌中均有差异表达ꎬ同时ｍｉＲ－４１１－５ｐ或可能
作为转移性乳癌的特异性血清标志物[３－８]Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ４１１Ｏｍｎｉｂｕｓ数据库(ＧＥＯ)ＧＳＥ７８０９１ꎮｍｉＲＧｅｎｅ－
组织低表达－５ｐ表达文件统计分析得出胃癌组织较胃粘膜(ｌｏｇＦＣ＝－３.２３９ꎬｔ＝－６.１１９ꎬＰ<０.０１)ꎬ然而目前为止ꎬｍｉＲ－４１１－５ｐ在人胃癌中还没有相应文献报道ꎻ本文旨在研究ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌中的表达情况及其在胃癌可能的生物学功能ꎮ
１ １.１ 材料和方法
集属于同一患者病变组织及正常胃粘膜组织材料 在皖南医学院第一附属医院手术室收ꎬ标本收集后冻存于液氮(所有患者术前均未接受放化疗及其他胃部手术并通过医院伦理委员会同意)ꎮ人胃癌细胞株ＢＧＣ－８２３、ＢＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１、ＡＧＳ及正常胃癌细胞ＲＰＭＩ－４１１－－５ｐｍｉｍｉｃ、ｍｉＲ１６４０购自ＧＥＳ－Ｈｙｃｌｏｎｅꎻ１购自中国科学院细胞库ꎻ－４１１－５ｐ胎牛血清购自ｎｅｇａｔｉｖｅ及转染试剂盒
ＣｌａｒｋꎻｍｉＲ由广州锐博生物科技公司提供ꎻＴＲｉｚｏｌ、逆转录试剂盒和ＳＹＢＲＧＲｅｅｎ试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司ꎻ靶基因引物购自上海生工生物工程１.２ 有限公司ꎮ
１.２.１ 方法
符合要求的癌及癌旁组织后ｑ－ＰＣＲ 自皖南医学院第一附属医院采集ꎬ取适量大小相近的组织块ꎬ剪碎研磨后ꎬ同６孔板细胞一并使用ＴＲｉｚｏｌ提取ＲＮＡꎬ测定浓度后ꎬ取浓度相近等量ｃＤＮＡ１μＬꎬ采用逆转录试剂盒逆转录成ｃＤＮＡꎮ选用２０μＬ体系ｍｉｎꎬ９５℃３ꎬ进行ｃＤＮＡ作ꎬ采用ｍｉＲＮＡｍｉｎꎬ４℃１０的合成ꎬｑＰＣＲｍｉｎꎬ逆转录反应条件为试剂盒扩增并测定目的基因反应结束后置于冰上操:４２℃６０９５℃的相对表达量ꎬ反应选用２０μＬ体系ꎬ扩增条件:结果采用１５ｍｉｎꎬ９４℃３０ＲＮＡ２－ΔΔＣｔ对目标基因ｓꎬ６０℃３２ｓꎬｍｉＲ共４０－４１１个循环－５ｐꎮ的实验上游引物表达进行相对定量:ＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＡＡＧＴＴＣＴＡＴꎻꎮ序列如下:ｍｉＲ下游引物－４１１－ｍｉ－５ｐ:
ＧＴＣＧＴＡＴＣＣＡＧＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＧＡＧＧＴＡＴＴＣＧＣＡＣＴＧ１.２.２ ＧＡＴＡＣＧＡＣＧＧＡＣＴＡꎮ
８２３、ＢＧＣ细胞培养和转染ＧＥＳ－８０３、ＳＧＣ－７９０１、 选取人胃癌细胞ＡＧＳ和正常胃癌ＢＧＣ细胞－的ＲＰＭＩ－１ꎮ－细胞培养于含１６４０培养基中１０％ꎬ放置在胎牛血清３７℃、１％、５％ＣＯ青链霉素ꎮ按转染试剂盒说明书进２饱和湿度的恒温培养箱中培养１.２.３ 行转染ꎮ
孔板中ꎬ细胞平板克隆实验每孔约５００个细胞 ꎬ将细胞消化后接种于每隔３天转染一次(转６染浓度为５０ｎｍｏｌ/ｍＬ)ꎬ１４~２１ｄ后当出现肉眼可见的集落时终止培养ꎬ吸去培养基ꎬＰＢＳ洗３次ꎬ４％多聚甲醛固定１５ｍｉｎꎬＰＢＳ洗３次ꎬ０.１％结晶紫(Ｓｏｌａｒ￣计数ｂｉｏ公司ꎮ
))染色１５~２０ｍｉｎꎬＰＢＳ洗３次ꎬ干燥、拍照、
１.２.４ 整细胞密度为ＣＣＫ－８检测细胞增殖１×１０４个/ｍＬꎮ 在将细胞消化重悬９６孔板中接种细ꎬ调胞悬液１００μＬ/孔ꎬ每组设５个复孔ꎬ将培养板放在培养箱培养(３７℃ꎬ５％ＣＯ说明书以最适浓度转染ꎬ转染２)ꎬ待细胞贴壁后按转染２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、７２ｈ后ꎬ每孔加入１０μＬ的ＣＣＫ－８(南京碧云天公司)溶液ꎬ１.２.５ 培养箱内孵育１ｈꎮ用酶标仪测定吸光度ꎮ
ｍｉＲ的胰－酶４１１细胞凋亡消－化５ｐꎬ－１５００ｒｍｉｍｉｃ 流式细胞术检测细胞凋亡/ｍｉｎꎬ转染离２４心ｈ后５ｍｉｎꎬ使用不含:ｈａｓ－收集细胞ＥＤＴＡＰＢＳꎻ用
５μＬ洗涤细胞两次避光反应Ａｎｎｅｘｉｎ１５Ｖｍｉｎꎬ－ＦＩＴＣ、５μＬꎻ加入５００μＬ通过ＡｎｎｅｘｉｎＰｒｏｐｉｄｉｕｍ的ＢｉｎｄｉｎｇＶ－ＦＩＴＣＩｏｄｉｄｅꎬＢｕｆｆｅｒ、/ＰＩ双染流混匀ꎻ式细胞计数定量分析ꎬ检测ｍｉＲ－４１１－５ｐ作用于胃癌１.２.６ ＡＧＳ室法检测胃癌细胞的迁移能力细胞迁移实验细胞株后对细胞凋亡的影响 应用Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅꎮ
５ｐ使用不含血清的ｍｉｍｉｃ、ｍｉＲ－４１１ＲＰＭＩ－５ｐ－ＮＣ１６４０的培养基重悬ＢＧＣꎮ将转染Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ－８２３细胞消化ｍｉＲ－４１１小－
ꎬ调整细胞、密度为８ｍ)将小室置于含的Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ５×１０５个/ｍＬꎬ于带聚碳酸酯滤膜(膜孔径为
２４１０％小室内种植细胞悬液胎牛血清ＲＰＭＩ－１００μＬ/孔ꎬ再到的细胞固定孔板内ꎬ孵育后、染色后２４ｈꎬ取膜下层细胞１６４０在荧光倒置显微镜下随机选ꎮ将以上收集培养基的取１.３ ５个１００倍镜视野ꎬ计算平均细胞数据ꎮ正态分布数据采用统计学方法 采用ꎮ
“ＳＰＳＳ２０.０均数±标准差统计软件分析数”表示ꎬ正态样本比较采用ｔ检验ꎬ两样本均数之间的比较采用两独立样本的ｔ检验ꎬ三组样本均数之问的比较采用单因素方差分析后以ＳＮＫ－ｑ检验进行两两比较ꎮ
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Ｐ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ
２ 结果
１４６ꎬｔ＝５.２０５ꎬＰ<０.０１)、ＳＧＣ－７９０１(０.５７９±０.０６９ꎬｔ＝６.０３２ꎬＰ<０.０１)、ＡＧＳ(０.６６４±０.１０２ꎬｔ＝４.０２１ꎬＰ<
２.１ ｑ－ＰＣＲ验证ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌中的表达情况 ｑ－ＰＣＲ结果显示:ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌组织中相对表达量(０.５０２±０.２４６)明显低于其癌旁组织(１.１９３±０.４３７)中的含量ꎬ差异有统计学意义(ｔ＝１(０.９０２±０.１４５)相比ꎬ人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３(０.３９４±０.０７５ꎬｔ＝９.３３２ꎬＰ<０.０１)、ＢＧＣ－８０３(０.５４５±０.－９.５５ꎬＰ<０.０１)(图１ａ)ꎻ与胃粘膜上皮细胞株ＧＥＳ－
０.０１)表达较低(图１ｂ)ꎮＢＧＣ－８２３细胞系经转染上调后ꎬ３组间ｍｉＲ－４１１－５ｐ的相对表达量差异有统计学意义(Ｆ＝２４５.２１ꎬＰ<０.０１)ꎬ其中上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ组的相对表达量为(４.０００±０.５８９)ꎬ较阴性对照组(０.８６３±０.０６４)或空白对照组(０.９５２±０.２７２)组与阴性对照组比较ꎬ差异无统计学意义(Ｐ>０.０５)(图１ｃ)ꎮ
明显升高ꎬ差异有统计学意义(Ｐ<０.０１)ꎬ空白对照
图１ ＰＣＲ检测ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌中的表达情况
ｂ ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌细胞及正常胃黏膜细胞的表达情况ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１
ａ ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌组织及正常组织的表达情况ꎬｎ＝４８ꎬ∗∗Ｐ<０.０１
２.２ 上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ抑制胃癌细胞增殖 平板克隆形成实验得出转染后(１１９.６０±１９.２３)克隆形成能力较阴性对照组(２２２.４０±２４.８２)及空白组(２４２.６０±１７.３９)明显减弱(Ｆ＝５０.６７３ꎬＰ<０.０１)(图２ａ、图２ｂ)ꎮ
ＣＣＫ－８实验显示转染２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、７２ｈ的ＯＤ
ｃ ＢＧＣ－８２３细胞分别转染ｍｉＲ－４１１－５ｐｍｉｍｉｃ、ｍｉＲ－４１１－５ｐｍｉｍｉｃｎｅｇａｔｉｖｅ和空白对照ꎬ目的基因的表达情况ꎬ∗∗Ｐ<０.０１
为(０.５８８±０.０７９)、(０.８２０±０.１００)、(１.３８９±０.２０４)、(２.０１９±０.２８８)ꎻ空白组的ＯＤ值分别为(０.６３６±０.１１３)、(０.８４１±０.１１６)、(１.４９２±０.１９９)、(２.１９６±０.４１４)ꎬｍｉｍｉｃ组增殖能力较其余两组明显降低(Ｐ<组比较ꎬ差异无统计学意义(Ｐ>０.０５)(图２ｃ)ꎮ０.０５)ꎬ差异有统计学意义ꎻ空白对照组与阴性对照
０.１８５)、(１.１３４±０.１６６)ꎻ阴性对照组的ＯＤ值分别
值分别为(０.１６４±０.０５２)、(０.３２９±０.０９９)、(０.７１６±
图２ 上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ抑制胃癌细胞增殖
ａ和ｂ是平板克隆实验结果ꎻｃ是ＣＣＫ－８实验结果ꎬ∗Ｐ<０.０５
２.３ 上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ促进胃癌细胞凋亡 流式细胞仪结果显示ꎬ在胃癌ＢＧＣ－８２３细胞中过表达
ｍｉＲ－４１１－５ｐ可诱导细胞发生早期凋亡反应(８.７２±
０.６６)％ꎬ与阴性对照组(１.２１±０.１８)％、空白对照组
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(１.１０±０.２７)％相比ꎬ差异具有统计学意义(Ｐ<０.０５)ꎬ见图３ａꎬ图３ｂꎮ
图３ 上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ促进胃癌细胞凋亡ａ和ｂ是流式细胞仪测定的凋亡结果ꎬ∗Ｐ<０.０５
２.４ 上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ抑制胃癌细胞迁移 迁移试验中ꎬ转染组胃癌细胞迁移的平均细胞数(３４８.８０±２４.１３)较阴性对照组(９０８.４０±５７.９４)及空白对照
组(９５２.２０±５１.３０)明显减少ꎬ差异均有统计学意义(Ｆ＝２５０.０７１ꎬＰ<０.０１)ꎬ见图４ａꎬ图４ｂꎮ
图４ 上调ｍｉＲ－４１１－５ｐ抑制胃癌细胞迁移ａ和ｂ是ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验结果图ꎬ∗Ｐ<０.０５
３ 讨论
不同肿瘤具有各自的独特的表达谱系ꎬ通过对肿瘤中改变最为显著的一个或几个做进一步的功能研究ꎮ研究发现ꎬｍｉ－ＲＮＡ几乎参与了所有的细胞生物学进程ꎬ比如细胞的增殖、凋亡、分化、迁移和侵袭等ｍｉｃｒｏＲＮＡ可以通过负调控靶基因ｍＲＮＡ水平介导其降解、结合功能蛋白、激活ＴＬＲ受体蛋白、负调控其他非编码ＲＮＡ的前体ＲＮＡ等方式影响肿瘤的发生及发展[９ꎬ１０－１３]ꎮ之前的一项研究表明ｍｉＲ－４１１－５ｐ的表达下调与膀胱癌进展有关[６]ꎮ林成辉等揭示了乳腺癌组织中ｍｉＲ－４１１－５ｐ的表达水平同乳腺癌骨转移相关ꎬ可作为独立预后因素[１４]ꎮ然而ꎬｍｉＲ－４１１－５ｐ的表达水平对胃癌的影响尚不清楚ꎮ为了探索ｍｉＲ－４１１－５ｐ与胃癌发病机制的相关性ꎬ本实验取４８例符合要求的要求的临床患者组织、４株胃癌细胞及１株胃粘膜上皮细胞行ｑ－ＰＣＲꎬ研究发现在胃癌组织及胃癌细胞中ｍｉＲ－４１１－５ｐ的
相对表达量较非肿瘤组织及细胞中表达下调ꎬ由此推测ｍｉＲ－４１１－５ｐ可能为肿瘤抑制因子ꎬｍｉＲ－１８７下调可能促进其发生发展胃癌ꎮ
为了进一步了解其相关功能ꎬ本研究转染ｍｉＲ－４１１－５ｐｍｉｍｉｃꎬ评估表达差异最明显细胞株ＭＧＣ－
８２３细胞的增殖能力、凋亡能力、迁移能力ꎮＣＣＫ－８及平板克隆数据显示过表达ｍｉＲ－４１１－５ｐ可以抑制ＧＣ细胞的增殖ꎻ凋亡实验提示过表达ｍｉＲ－４１１－５ｐ可以略微促进细胞早期凋亡ꎻ迁移实验反映了过表达ｍｉＲ－４１１－５ｐ可以明显抑制细胞的迁移能力ꎮ实验证实ｍｉＲ－４１１－５ｐ具有复杂的生物功能ꎬ然而ｍｉＲ－４１１－５ｐ的分子机制还有待进一步调查研究ꎬＣｈｅｎ、Ｇｕｏ、Ｚｈａｎｇ、Ｘｉａ等人发现了ｍｉＲ－４１１－５ｐ可能通过直接裂解或抑制靶基因的表达ꎬ进而影响细胞增殖、凋亡及转移[３ꎬ６ꎬ１５￣１６]ꎮ本实验荧光素酶验证尚未成功ꎬ缺少相应靶基因及其功能ꎻ有待进一步研究ꎮ
综上所述ꎬ本研究证明与正常胃粘膜上皮组织
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ＨｕｍａｎＢｌａｄｄｅｒＣａｎｃｅｒ[Ｊ].ＭｏｌＴｈｅｒＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓꎬ２０１８ꎬ１１:３１２－[７] ＳＨＡＮＤꎬＳＨＡＮＧＹ.ＭｉｃｒｏＲＮＡ－４１１ｉｎｈｉｂｉｔｓｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｐｒｏ￣
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牡丹江医学院学报 Ｆｅｂ２０１９
相比ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌组织中的表达下调ꎮ此外ꎬｍｉＲ－４１１－５ｐ的表达情况与患者的病理分期及预后关系尚未可知ꎬ仍需进一步扩大数据ꎮ本研究的数据也表明ｍｉＲ－４１１－５ｐ在体外能够抑制细胞迁移及增殖ꎮ
本研究首次对ｍｉＲ－４１１－５ｐ在胃癌组织中抑制肿瘤的作用进行了研究ꎬ或可进一步为胃癌的治疗及筛选提供新方向ꎮ
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(收稿日期:２０１８－１０－３１ 本文编辑:郭丽双)
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(收稿日期:２０１８－０６－１５ 本文编辑:张作虎)
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